Лабораторные методы исследования
Для количественного определения изоферментов ЛДГ существует ряд методов, основанных на различии в апоферменте изозимов. Применяют методы электрофореза, хроматографии, термической инактивности и др. В клинике наиболее широко используется метод зонального электрофореза на агаровом геле с окрашиванием тетрахолиевыми солями, адсорбция на ДЗАЕ-целлюлозе и термическое инактивирование. Наиболее точны и надежны методы, основанные на электрофоретическом разделении изоферментов [Юрков Ю….
После окончания электрофореза пластинки перекладывают в специальную камеру для окраски, заливают красящую смесь и инкубируют в термостате 2 ч при 37 °С. Затем сливают смесь и несколько раз тщательно промывают агаровые пластинки дистиллированной водой. Сушку пластинок производят следующим образом: вырезанные по форме пластинки полоски хроматографической бумаги осторожно накладывают на агар, не сдвигая его. На чистую…
Общая активность ЛДГ в моче больных пиелонефритом в среднем достигает 37,5 ± 3,5 единицы Вроб-левского, но какой-либо зависимости ее от формы и степени тяжести пиелонефрита не отмечено. Перспективными для изучения при воспалительных заболеваниях почек являются ферменты малатдегидрогеназа (МДГ) и альдолаза (АЛД). МДГ относится к ферментам цикла Кребса, который катализирует обратимую реакцию окисления яблочной кислоты в…
Исследуемые сыворотки разводят 1:10 с помощью кроличьей сыворотки (в разведении 1:250), подогревают в электрической водяной бане при 54 °С в течение 20 мин (для разрушения комплемента) и охлаждают. Затем к ним добавляют формалинизированные или свежие эритроциты барана из расчета 0,2 мл на 1 мл сыворотки, содержимое пробирки встряхивают и помещают на 30 мин в термостат…
Приготовленные Аг разводят определенным количеством буфера (рН 6,4) и соединяют с раствором формалинизированных и танизированных эритроцитов в таком количестве, чтобы окончательное разведение Аг было 1:10. Установлено, что именно это разведение является оптимальным, так как не дает гемолиза или агглютинации эритроцитов в отсутствие специфической сыворотки. Содержимое колбочек встряхивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 1…
Свежевыпущенную мочу центрифугируют в течение 10 мин при 1500 об/мин, отсасывают надосадочную жидкость и осадок дважды промывают в изотоническом растворе хлорида натрия с фосфатным буфером (рН 7,3). В отмытый осадок добавляют 0,2 мл разведенной 1:5 люминесцирующей кроличьей сыворотки против глобулинов человека. Осадок мочи вместе с сывороткой инкубируют при 37 °С в течение 30 мин, после…
А. Ф. Каковский (1910) предложил собирать утреннюю мочу за 8 ч с последующим подсчетом форменных элементов, а в 1925 г. F. Addis предложил подсчет форменных элементов в 12-часовой ночной порции мочи, собранной в условиях строгого ограничения жидкости в утренние и дневные часы. В настоящее время применяют различные модификации метода Каковского — Аддиса в зависимости от…
Проба Фольгарда в отличие от физиологической пробы Зимницкого проводится в условиях искусственного водного режима. В классическом варианте пробу проводят в два этапа: на первом проводят водную нагрузку для суждения о возможности почек к разведению, на втором — обследуемый находится в искусственных условиях сухоядения для суждения о максимальной концентрационной способности почек. В связи с тем что…
Второй способ Каковского — Аддиса Сбор мочи производят в течение суток. Этот способ более объективен, так как при нем не теряется ни одна порция мочи, что более точно отражает выраженность мочевых симптомов. В педиатрической практике он наиболее распространен, так как дети находятся на физиологическом режиме дня и диете. Сбор мочи начинают в 7 ч утра…
Методика Накануне дня исследования после 18 ч ограничивают прием жидкости, в 20 ч однократно вводят вазопрессин. В течение последующих суток собирают мочу, измеряют количество и относительную плотность в каждой порции. В норме максимальная плотность мочи не должна быть ниже 1020. Отсутствие реакции на вазопрессин наблюдается при различных состояниях организма (водная интоксикация, гипокалиемия и др.), а…
Проба Нечипоренко. Предложена в 1961 г. Производят подсчет форменных элементов осадка мочи в 1 мл мочи. Исследованию подвергают однократно собранную порцию мочи (чаще всего утреннюю порцию, но желательно производить исследование и в другие периоды для суждения о цикличности и характере воспалительного процесса). Можно исследовать и среднюю порцию мочи, что исключает попадание гнойного экссудата из нижних…
Канальцевый аппарат почек (в большей степени дистальные отделы) обладает способностью выделять кислые водородные ионы против концентрационного градиента. Осуществление этого процесса происходит только активным путем с участием ферментов (карбоангидраза, глутаминаза и др.). Образующиеся в результате химических реакций водородные ионы «обмениваются» на ионы натрия, поступающие в соединении с бикарбонатными ионами обратно в кровь (процессы ацидогенеза и аммониогенеза)….
