13 марта 2009

Метод Амбурже

Второй способ Каковского — Аддиса

Сбор мочи производят в течение суток. Этот способ более объективен, так как при нем не теряется ни одна порция мочи, что более точно отражает выраженность мочевых симптомов. В педиатрической практике он наиболее распространен, так как дети находятся на физиологическом режиме дня и диете. Сбор мочи начинают в 7 ч утра (эту порцию мочи выливают). При последующих естественных мочеиспусканиях мочу собирают в чистую посуду, охлаждают до комнатной температуры и переносят в общую посуду, хранящуюся в прохладном месте или холодильнике.

Последнюю порцию мочи собирают в 7 ч утра следующего дня. Измеряют общее количество суточной мочи, хорошо смешивают и 100 — 200 мл ее отправляют в лабораторию. Центрифугируют 10 мл мочи по описанной выше методике. Исследованию подвергают оставшийся осадок в 1 мл. Капля взвеси исследуется в счетной камере.

Метод Амбурже

Предложен в 1954 г. Производят сбор мочи за 3 ч (обычно утром с 7 до 10 ч, 7-часовую порцию мочи выливают). После измерения общего количества мочи центрифугируют 10 мл ее в течение 10 мин при 1500 об/мин. Подвергают исследованию 1 мл осадка. Далее подсчет клеток производят в зависимости от камеры, в которой определяют количество форменных элементов.

Например, при использовании камеры Фукса — Розенталя подсчет производят по следующей формуле: x=(100*V*N)/3,2,

где:

  • х — экскреция форменных элементов в 3-часовой порции мочи;
  • V — объем трехчасовой порции мочи;
  • N — количество клеток в камере.

Затем подсчитывают количество клеток за 1 мин или за 1 ч путем деления количества клеток в 3-часовом объеме мочи на 180 (количество минут) или на 3 (количество часов).

«Детская урология», Н.А. Лопаткин



Исследуемые сыворотки разводят 1:10 с помощью кроличьей сыворотки (в разведении 1:250), подогревают в электрической водяной бане при 54 °С в течение 20 мин (для разрушения комплемента) и охлаждают. Затем к ним добавляют формалинизированные или свежие эритроциты барана из расчета 0,2 мл на 1 мл сыворотки, содержимое пробирки встряхивают и помещают на 30 мин в термостат…

Приготовленные Аг разводят определенным количеством буфера (рН 6,4) и соединяют с раствором формалинизированных и танизированных эритроцитов в таком количестве, чтобы окончательное разведение Аг было 1:10. Установлено, что именно это разведение является оптимальным, так как не дает гемолиза или агглютинации эритроцитов в отсутствие специфической сыворотки. Содержимое колбочек встряхивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 1…

Свежевыпущенную мочу центрифугируют в течение 10 мин при 1500 об/мин, отсасывают надосадочную жидкость и осадок дважды промывают в изотоническом растворе хлорида натрия с фосфатным буфером (рН 7,3). В отмытый осадок добавляют 0,2 мл разведенной 1:5 люминесцирующей кроличьей сыворотки против глобулинов человека. Осадок мочи вместе с сывороткой инкубируют при 37 °С в течение 30 мин, после…

Для количественного определения изоферментов ЛДГ существует ряд методов, основанных на различии в апоферменте изозимов. Применяют методы электрофореза, хроматографии, термической инактивности и др. В клинике наиболее широко используется метод зонального электрофореза на агаровом геле с окрашиванием тетрахолиевыми солями, адсорбция на ДЗАЕ-целлюлозе и термическое инактивирование. Наиболее точны и надежны методы, основанные на электрофоретическом разделении изоферментов [Юрков Ю….

После окончания электрофореза пластинки перекладывают в специальную камеру для окраски, заливают красящую смесь и инкубируют в термостате 2 ч при 37 °С. Затем сливают смесь и несколько раз тщательно промывают агаровые пластинки дистиллированной водой. Сушку пластинок производят следующим образом: вырезанные по форме пластинки полоски хроматографической бумаги осторожно накладывают на агар, не сдвигая его. На чистую…