16 марта 2009

Общая активность ЛДГ

Общая активность ЛДГ в моче больных пиелонефритом в среднем достигает 37,5 ± 3,5 единицы Вроб-левского, но какой-либо зависимости ее от формы и степени тяжести пиелонефрита не отмечено.

Перспективными для изучения при воспалительных заболеваниях почек являются ферменты малатдегидрогеназа (МДГ) и альдолаза (АЛД). МДГ относится к ферментам цикла Кребса, который катализирует обратимую реакцию окисления яблочной кислоты в щавелевоуксусную при участии кофермента НАД.

Установлено, что МДГ находится во всех тканях организма, в том числе и почечной, в виде двух клеточных форм:

  • митохондриальной (М-МДГ);
  • цитоплазматической (Ц-МДГ).

Считают, что катодные фракции МДГ по происхождению являются митохондриальными, а анодные — цитоплазматическими. У здоровых детей обе фракции обнаруживаются в следовых количествах с преобладанием катодной (М-МДГ), реже определяется одна фракция (катодная).

Общая активность МДГ в 1 мл мочи составляет 1,43 ± 0,11 единиц Вроблевского, в суточной моче — 695,22 ± 0,86 единиц. При воспалительных заболеваниях почек (пиелонефрите) в спектре МДГ мочи в большинстве случаев содержится от 2 до 4 фракций (2 анодные и 2 катодные). Абсолютная величина катодных фракций МДГ при обструктивном пиелонефрите в 25 раз превышает те же показатели у здоровых детей и в 8 раз — у больных необструктивным пиелонефритом. Общая активность МДГ в моче по сравнению со здороввши детьми в 20 раз выше [Волкова Л. Д., 1975].

При изучении пиелонефрита представляет интерес исследование АЛД — фермента, катализирующего расщепление 1,6-ди фосфорного эфира фруктозы на фосфодриозу.

Установлено, что спектр изоферментов АЛД в моче здоровых детей характеризуется двумя фракциями: анодной — АЛД-1 (М= 1,43 ±0,24) и катодной — АЛД-3 (М = 1,42 + 0,24). У многих здоровых детей фракции АЛД полностью отсутствовали. У больных острым пиелонефритом в активной фазе болезни общая активность АЛД повышается в 2 раза по сравнению со здоровыми детьми.

Спектр изоферментов АЛД характеризуется увеличением активности АЛД-1 и, кроме того, АЛД-2, отсутствующей у здоровых детей [Николаева Э. В., 1973]. При хроническом пиелонефрите обнаруживается АЛД-4, которая отсутствует при остром пиелонефрите.

При хронической почечной недостаточности общая активность ЛДГ и МДГ понижается. Менее активны также катодные фракции. У некоторых детей спектр изоферментов не отличается от такового у здорового ребенка.

Указанные данные можно объяснить рядом причин:

  • общим уменьшением числа действующих нефронов, в которых резко нарушается канальцевая функция;
  • инактивацией ферментов на почве полиурии, являющейся следствием резкого расстройства выделительной функции почек;
  • угнетением синтеза катодных фракций вследствие резких нарушений обменных процессов в патологически измененных почках.

Иммунологические методы исследования. Большинство авторов для выявления антибактериальных антител (АБА) используют реакции непрямой пассивной гемагглютинации к аутоштаммам Е. coli, выделенным из мочи (РПГА). Данная реакция считается наиболее адекватной для выявления Ат, относящихся к классу IgM, которые вырабатываются при остром рецидиве хронического пиелонефрита, часто вызываемом реинфекцией.

«Детская урология», Н.А. Лопаткин



Исследуемые сыворотки разводят 1:10 с помощью кроличьей сыворотки (в разведении 1:250), подогревают в электрической водяной бане при 54 °С в течение 20 мин (для разрушения комплемента) и охлаждают. Затем к ним добавляют формалинизированные или свежие эритроциты барана из расчета 0,2 мл на 1 мл сыворотки, содержимое пробирки встряхивают и помещают на 30 мин в термостат…

Приготовленные Аг разводят определенным количеством буфера (рН 6,4) и соединяют с раствором формалинизированных и танизированных эритроцитов в таком количестве, чтобы окончательное разведение Аг было 1:10. Установлено, что именно это разведение является оптимальным, так как не дает гемолиза или агглютинации эритроцитов в отсутствие специфической сыворотки. Содержимое колбочек встряхивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 1…

Свежевыпущенную мочу центрифугируют в течение 10 мин при 1500 об/мин, отсасывают надосадочную жидкость и осадок дважды промывают в изотоническом растворе хлорида натрия с фосфатным буфером (рН 7,3). В отмытый осадок добавляют 0,2 мл разведенной 1:5 люминесцирующей кроличьей сыворотки против глобулинов человека. Осадок мочи вместе с сывороткой инкубируют при 37 °С в течение 30 мин, после…

Для количественного определения изоферментов ЛДГ существует ряд методов, основанных на различии в апоферменте изозимов. Применяют методы электрофореза, хроматографии, термической инактивности и др. В клинике наиболее широко используется метод зонального электрофореза на агаровом геле с окрашиванием тетрахолиевыми солями, адсорбция на ДЗАЕ-целлюлозе и термическое инактивирование. Наиболее точны и надежны методы, основанные на электрофоретическом разделении изоферментов [Юрков Ю….

После окончания электрофореза пластинки перекладывают в специальную камеру для окраски, заливают красящую смесь и инкубируют в термостате 2 ч при 37 °С. Затем сливают смесь и несколько раз тщательно промывают агаровые пластинки дистиллированной водой. Сушку пластинок производят следующим образом: вырезанные по форме пластинки полоски хроматографической бумаги осторожно накладывают на агар, не сдвигая его. На чистую…