13 марта 2009

Проба Нечипоренко и метод Стенсфилда и Уэбба

Проба Нечипоренко. Предложена в 1961 г. Производят подсчет форменных элементов осадка мочи в 1 мл мочи. Исследованию подвергают однократно собранную порцию мочи (чаще всего утреннюю порцию, но желательно производить исследование и в другие периоды для суждения о цикличности и характере воспалительного процесса).

Можно исследовать и среднюю порцию мочи, что исключает попадание гнойного экссудата из нижних мочевых путей. Центрифугируют 10 мл мочи. В счетной камере определяют количество клеток в 1 мм3, затем в 1 мл по описанной выше методике. Общее количество мочи не учитывают. Результат анализа выражают как количество клеток в 1 мл мочи.

Проба Нечипоренко нашла широкое применение, особенно в хирургической практике, в том числе у детей, так как позволяет установить сторону поражения почек при раздельном получении мочи путем катетеризации мочеточников. Она удобна и в амбулаторной педиатрической практике, так как необременительна и дает возможность быстрого получения результатов.

Метод Стенсфилда и Уэбба. Stansfield и Webb в 1953 г. предложили подсчитывать форменные элементы крови в нецентрифугированной моче (в педиатрической практике этот метод модифицирован и применен впервые А. Б. Канатбаевой в 1971 г.). В последние годы метод используется все более широко, так как позволяет устранить недостатки центрифугирования. Количественный подсчет форменных элементов можно производить в суточном или 3-часовом количестве мочи, а также в однократно собранной порции. Подсчет числа клеток производят по всей камере.

Единственным отличием при подсчете клеток является отсутствие деления на 10 (степень концентрирования, так как не производилось центрифугирования), т. е. можно пользоваться формулой:

(1000*V*N)/3,2.

Путем деления общего числа клеток на количество часов или минут легко высчитать часовую или минутную экскрецию клеток.

Количество форменных элементов, экскретируемых с мочой

Метод исследования Единица измерения Лейкоциты Эритроциты
Каковского — Аддиса За 24 ч 0 — 2 000 000 0 — 1 000 000
Амбурже » 1 мин 0 — 2 000 0 — 750
» 1 ч 0 — 120 000 0 — 45 000
Нечипоренко В 1 мл 0 — 2 000 0 — 1 000
Стенсфилда и Уэбба » 1 мм3 0 — 10 0 — 3
Канатбаевой За 1 мин 0 — 2 500 0 — 1 000
» 24 ч 0 — 2 500 00 0 — 1 500 000

«Детская урология», Н.А. Лопаткин



Для количественного определения изоферментов ЛДГ существует ряд методов, основанных на различии в апоферменте изозимов. Применяют методы электрофореза, хроматографии, термической инактивности и др. В клинике наиболее широко используется метод зонального электрофореза на агаровом геле с окрашиванием тетрахолиевыми солями, адсорбция на ДЗАЕ-целлюлозе и термическое инактивирование. Наиболее точны и надежны методы, основанные на электрофоретическом разделении изоферментов [Юрков Ю….

После окончания электрофореза пластинки перекладывают в специальную камеру для окраски, заливают красящую смесь и инкубируют в термостате 2 ч при 37 °С. Затем сливают смесь и несколько раз тщательно промывают агаровые пластинки дистиллированной водой. Сушку пластинок производят следующим образом: вырезанные по форме пластинки полоски хроматографической бумаги осторожно накладывают на агар, не сдвигая его. На чистую…

Общая активность ЛДГ в моче больных пиелонефритом в среднем достигает 37,5 ± 3,5 единицы Вроб-левского, но какой-либо зависимости ее от формы и степени тяжести пиелонефрита не отмечено. Перспективными для изучения при воспалительных заболеваниях почек являются ферменты малатдегидрогеназа (МДГ) и альдолаза (АЛД). МДГ относится к ферментам цикла Кребса, который катализирует обратимую реакцию окисления яблочной кислоты в…

Исследуемые сыворотки разводят 1:10 с помощью кроличьей сыворотки (в разведении 1:250), подогревают в электрической водяной бане при 54 °С в течение 20 мин (для разрушения комплемента) и охлаждают. Затем к ним добавляют формалинизированные или свежие эритроциты барана из расчета 0,2 мл на 1 мл сыворотки, содержимое пробирки встряхивают и помещают на 30 мин в термостат…

Приготовленные Аг разводят определенным количеством буфера (рН 6,4) и соединяют с раствором формалинизированных и танизированных эритроцитов в таком количестве, чтобы окончательное разведение Аг было 1:10. Установлено, что именно это разведение является оптимальным, так как не дает гемолиза или агглютинации эритроцитов в отсутствие специфической сыворотки. Содержимое колбочек встряхивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 1…