13 марта 2009

Проба Каковского — Аддиса

А. Ф. Каковский (1910) предложил собирать утреннюю мочу за 8 ч с последующим подсчетом форменных элементов, а в 1925 г. F. Addis предложил подсчет форменных элементов в 12-часовой ночной порции мочи, собранной в условиях строгого ограничения жидкости в утренние и дневные часы.

В настоящее время применяют различные модификации метода Каковского — Аддиса в зависимости от времени сбора мочи (за 10 — 12, 24 ч). Выбор метода сбора мочи зависит от возраста больного (у маленького ребенка трудно собрать суточную мочу). В любом случае следует рекомендовать некоторое ограничение приема жидкости в день сбора мочи. Первый способ. Собирают мочу за 10 — 12 ч (лучше ночные порции с 22 ч до . 8 ч утра).

Мочу собирают в один сосуд, который сохраняют в прохладном месте. Измеряют общее количество мочи. Осторожно взбалтывают и из общего количества берут в центрифужную пробирку такое количество мочи, которое соответствует количеству ее, выделенной за 12 мин, т. е. за 1/5 часа.

Это количество мочи можно определить по формуле: x=V/(t*5),

где:

  • х — количество мочи, выделенной за 12 мин;
  • V — общий объем мочи (мл), выделенной за 10 — 12 ч;
  • t — количество часов, в течение которого производился сбор мочи;
  • 5 — число, определяющее объем мочи за 12 мин, т. е. за 1/5 ч.

Мочу центрифугируют при 1000 — 1500 об/мин (при большем числе оборотов возможны разрушение и склеивание форменных элементов осадка мочи). Надосадочную жидкость осторожно удаляют пипеткой, оставив 0,5 — 1 мл осадка мочи. Осадок хорошо смешивают и каплю взвеси переносят в гемоцитометр для подсчета форменных элементов в 1 мм3. Для этой цели наиболее доступна счетная камера Горяева (1 мл при обильном осадке мочи). Подсчет форменных элементов производят по всей камере Горяева.

Определив количество форменных элементов в 1 мм3, вычисляют их содержание в суточном количестве мочи. Полученное число умножают на 500, так как для исследования брали 0,5 мл/500 мм3 мочи. Найденное число, означающее количество форменных элементов в объеме мочи за 1/5 ч, умножают на 5 (за 1 ч) и на 24. Конечный результат означает количество форменных элементов в суточной моче.

Можно производить подсчет количества форменных элементов по следующей формуле: количество форменных элементов в 1 мм3 мочи * 60 000 (так как 500, 5 и 245 — постоянные величины) или на 120 000 при наличии обильного осадка в 1 мл мочи.

В лабораторной практике широко используют камеру Фукса — Розенталя с большим объемом (3,2 мм3), в которой подсчитывают форменные элементы по всей сетке.

Расчет: полученное количество форменных элементов по всей камере пересчитывают на 1 мм3. Для этого общее количество форменных элементов делят на 3,2. Для определения количества форменных элементов в 1 мл мочи это число умножают на 1000, так как для исследования брали 1 мл мочи, и делят на 10 (степень концентрирования при центрифугировании). Зная суточный объем мочи, подсчитывают количество клеток, экскретированных за сутки.

Расчет можно произвести по формуле: x=(1000*V*N)/(3,2*10) или (1000*V*N)/3,2,

где:

  • х — суточная экскреция форменных элементов;
  • N — количество клеток в камере Фукса — Розенталя;
  • V — суточный объем мочи.

«Детская урология», Н.А. Лопаткин



Исследуемые сыворотки разводят 1:10 с помощью кроличьей сыворотки (в разведении 1:250), подогревают в электрической водяной бане при 54 °С в течение 20 мин (для разрушения комплемента) и охлаждают. Затем к ним добавляют формалинизированные или свежие эритроциты барана из расчета 0,2 мл на 1 мл сыворотки, содержимое пробирки встряхивают и помещают на 30 мин в термостат…

Приготовленные Аг разводят определенным количеством буфера (рН 6,4) и соединяют с раствором формалинизированных и танизированных эритроцитов в таком количестве, чтобы окончательное разведение Аг было 1:10. Установлено, что именно это разведение является оптимальным, так как не дает гемолиза или агглютинации эритроцитов в отсутствие специфической сыворотки. Содержимое колбочек встряхивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 1…

Свежевыпущенную мочу центрифугируют в течение 10 мин при 1500 об/мин, отсасывают надосадочную жидкость и осадок дважды промывают в изотоническом растворе хлорида натрия с фосфатным буфером (рН 7,3). В отмытый осадок добавляют 0,2 мл разведенной 1:5 люминесцирующей кроличьей сыворотки против глобулинов человека. Осадок мочи вместе с сывороткой инкубируют при 37 °С в течение 30 мин, после…

Для количественного определения изоферментов ЛДГ существует ряд методов, основанных на различии в апоферменте изозимов. Применяют методы электрофореза, хроматографии, термической инактивности и др. В клинике наиболее широко используется метод зонального электрофореза на агаровом геле с окрашиванием тетрахолиевыми солями, адсорбция на ДЗАЕ-целлюлозе и термическое инактивирование. Наиболее точны и надежны методы, основанные на электрофоретическом разделении изоферментов [Юрков Ю….

После окончания электрофореза пластинки перекладывают в специальную камеру для окраски, заливают красящую смесь и инкубируют в термостате 2 ч при 37 °С. Затем сливают смесь и несколько раз тщательно промывают агаровые пластинки дистиллированной водой. Сушку пластинок производят следующим образом: вырезанные по форме пластинки полоски хроматографической бумаги осторожно накладывают на агар, не сдвигая его. На чистую…