13 марта 2009

Методы определения осмотического концентрирования

Методика

Накануне дня исследования после 18 ч ограничивают прием жидкости, в 20 ч однократно вводят вазопрессин. В течение последующих суток собирают мочу, измеряют количество и относительную плотность в каждой порции. В норме максимальная плотность мочи не должна быть ниже 1020. Отсутствие реакции на вазопрессин наблюдается при различных состояниях организма (водная интоксикация, гипокалиемия и др.), а также при гипоадренокортицизме и паренхиматозных поражениях почек.

В последние годы для определения относительной плотности мочи находит применение рефрактометрический метод, при котором для исследования достаточно 2 — 3 капли мочи. Одновременно определяют плотность мочи урометром и показатели преломления мочи, между которыми установлена определенная зависимость.

Можно использовать формулу: (n — 1,3332)/4+1000,

где: n — показатель преломления, 1,3332, 1000 — эмпирические коэффициенты. В педиатрической практике подробно разработаны и внедрены методы определения осмотического концентрирования [Сергеева Т. В., 1970]. Рекомендуется определение осмотического концентрирования в условиях 36-часовой дегидратации в сочетании со стандартной диетой, содержащей 2 г животного белка на 1 кг массы тела в сутки при назначении детям старше 3-летнего возраста. Детям старше 5 лет пробу с сухоядением проводят в условиях 36-часового сухоядения.

Методика

Накануне дня исследования с 19 ч больному ограничивают применение жидкости. С 7 ч утра следующего дня после опорожнения мочевого пузыря производят сбор отдельных порций мочи в течение суток. Сухоядение продолжают в течение всего периода проведения пробы. По окончании сбора мочи берут кровь из вены для исследования осмотической концентрации сыворотки. В каждой порции мочи определяют ее количество и концентрацию осмотически активных веществ. Определение осмотической концентрации производят методом криоскопии с помощью термистора.

Функцию осмотического концентрирования оценивают путем определения максимальной величины концентрации осмотически активных веществ в моче (Uосм.макс) и концентрационного индекса осмотически активных веществ (Uосм.макс/Pосм), У детей концентрационная способность почек достигает уровня, наблюдаемого у взрослого, к 1 — 1,5 годам. В норме в условиях сухоядения максимальная плотность мочи превышает 1026, осмолярность — 900 мосмоль/л, а концентрированный индекс — 3,0. Новорожденные в условиях концентрационной пробы выделяют мочу, осмолярность которой не выше 600 — 800 мосмоль/л [Наумова. В. И. и др., 1978].

При хроническом пиелонефрите и врожденных заболеваниях почек концентрационная способность почек нарушается. При хронической почечной недостаточности она снижается до уровня изостенурии. Функция осмотического концентрирования считается нарушенной, если максимальная осмолярность мочи ниже 900 мосмоль/л, а максимальный концентрационный индекс осмотически активных веществ ниже 3,63 [Сергеева Т. В., 1980].

«Детская урология», Н.А. Лопаткин



Для количественного определения изоферментов ЛДГ существует ряд методов, основанных на различии в апоферменте изозимов. Применяют методы электрофореза, хроматографии, термической инактивности и др. В клинике наиболее широко используется метод зонального электрофореза на агаровом геле с окрашиванием тетрахолиевыми солями, адсорбция на ДЗАЕ-целлюлозе и термическое инактивирование. Наиболее точны и надежны методы, основанные на электрофоретическом разделении изоферментов [Юрков Ю….

После окончания электрофореза пластинки перекладывают в специальную камеру для окраски, заливают красящую смесь и инкубируют в термостате 2 ч при 37 °С. Затем сливают смесь и несколько раз тщательно промывают агаровые пластинки дистиллированной водой. Сушку пластинок производят следующим образом: вырезанные по форме пластинки полоски хроматографической бумаги осторожно накладывают на агар, не сдвигая его. На чистую…

Общая активность ЛДГ в моче больных пиелонефритом в среднем достигает 37,5 ± 3,5 единицы Вроб-левского, но какой-либо зависимости ее от формы и степени тяжести пиелонефрита не отмечено. Перспективными для изучения при воспалительных заболеваниях почек являются ферменты малатдегидрогеназа (МДГ) и альдолаза (АЛД). МДГ относится к ферментам цикла Кребса, который катализирует обратимую реакцию окисления яблочной кислоты в…

Исследуемые сыворотки разводят 1:10 с помощью кроличьей сыворотки (в разведении 1:250), подогревают в электрической водяной бане при 54 °С в течение 20 мин (для разрушения комплемента) и охлаждают. Затем к ним добавляют формалинизированные или свежие эритроциты барана из расчета 0,2 мл на 1 мл сыворотки, содержимое пробирки встряхивают и помещают на 30 мин в термостат…

Приготовленные Аг разводят определенным количеством буфера (рН 6,4) и соединяют с раствором формалинизированных и танизированных эритроцитов в таком количестве, чтобы окончательное разведение Аг было 1:10. Установлено, что именно это разведение является оптимальным, так как не дает гемолиза или агглютинации эритроцитов в отсутствие специфической сыворотки. Содержимое колбочек встряхивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 1…