Механизмы вирусного онкогенеза

Анализ многочисленных клеточных линий, трансформированных паповавирусами, показал, что специфика встраивания вирусного генома, обусловливающая трансформацию, обеспечивает, как правило, транскрипцию только ранней области вирусного генома. Транскрипция интегрированной провирусной ДНК, по-видимому, начинается на клеточном промоторе и контролируется клеточными механизмами. Вместе с тем обнаружено, что импульсивно меченная РНК из клеток, трансформированных SV40, гибридизируется с ДНК SV40, содержащей значительное количество…

Клетки, трансформированные HVS, содержали оба типа вирусной ДНК: 0,69 — 2,27% Н-ДНК, что соответствует 83 — 247 геномам на клетку, и 0,72 — 1,92% L-ДНК (Fleckenstein et al., 1977). Большинство вирусных геномов в трансформированных культурах лимфоцитов, вероятно, дефектны, поскольку часть последовательностей, обнаруживающихся в ДНК вирионов, в ДНК, изолированной из трансформированных клеток, отсутствует. Во всех трансформированных…

Обнаружена интеграция ДНК SV40 в геном клетки при литической инфекции в форме отдельных фрагментов с субгеномной длиной. Такие интегрированные молекулы появляются через день после заражения и способны к репликации. Впервые линейная ковалентная интеграция выявляется в то время, когда определяется синтез Т-антигена (Tuxler, 1977). Только несколько копий вирусного генома интегрируется между 10 ч и 18 ч…

Установлено, что частично очищенный Т-антиген способен связываться с двуспиральной нативной ДНК клетки и со сверхскрученной ДНК SV40. Точка соединения Т-антигена на вирусной ДНК картирована с помощью электронной микроскопии при использовании антител с ферритиновой меткой. Она оказалась близкой (или идентичной) точке инициации репликации вирусной ДНК (0,67 ед. карты). В то же время рекомбинации между ДНК клетки…

Гибридизационный анализ импульсно меченной РНК показал, что в составе различных фракций аденовирусных мРНК имеются общие нуклеотидные последовательности, комплементарные одним и тем же фрагментам ДНК А2, которые, следовательно, являются общими стартовыми точками транскрипции. Первоначальным продуктом транскрипции аденовирусной ДНК в инфицированных клетках является РНК-предшественник с высокой молекулярной массой (25 000 — 35 000 оснований). В условиях последующего…

Интеграция и хромосомная локализация вирусных геновКовалентная интеграция вирусного и клеточного геномов, приводящая к образованию единой генетической структуры, является твердо установленным фактом для онковирусов группы папова, аденовирусов и онкорнавирусов. В отношении вирусов группы герпеса показано, что устойчивые к действию щелочей связи между вирусной и клеточной ДНК отсутствуют, хотя при их взаимодействии могут происходить щелочнолабильные нековалентные связи….

Использование кинетики реассоциации меченой вирусной ДНК в присутствии немеченой ДНК из нормальных и трансформированных вирусом полиомы и SV40 клеток хомяка и мыши позволило определить число вирусных ДНК-копий. Для исследованных культур оно колебалось от 1 до 8,75 в расчете на диплоидный геном, в среднем выявляются два геномных эквивалента вируса. Однако, как выяснилось, частота встречаемости каждого из…

После обработки EcoRI ДНК А12 выделен фрагмент С (16% левой части вирусного генома). При использовании ДНК-полимеразы из Е. coli на матрице ДНК А12 и С-фрагмента in vitro синтезирован ДНК-продукт, с помощью которого был осуществлен анализ на присутствие в геноме опухолевых клеток человека и грызунов последовательностей ДНК А12, в том числе и трансформирующих. В первую очередь…

Показана идентичность геномов ВЭБ, обнаруживаемых в клетках лимфомы Беркитта, карциноме носоглотки и при инфекционном мононуклеозе. Вирусная ДНК из клеток карциномы носоглотки в градиенте глицерина разделялась на два компонента: 101S и 64S, т. е. на ковалентнозамкнутую и открытую циркулярную формы ДНК соответственно. Наличие полноценных ковалентнозамкнутых форм вирусной ДНК подтверждено также электронной микроскопией. Молекулярная масса циркулярных ДНК…

Фрагменты ДНК SV40, обладающие трансформирующей активностью, содержат один ранний А-ген, включающий 48% емкости генома. Эндорестриктаза Нра I, которая вызывает разрыв в ранней области, блокирует трансформирующую активность генома SV40. Фрагмент В (0,375 — 0,735 ед. карты) составляет 36% генома и содержит около 60% его ранней области, кодирующей синтез полипептида с молекулярной массой 40 000 — 50…

Картирование ранней цитоплазматической мРНК вируса PY показало, что 5´-конец располагается на границе Е- и С-фрагментов ДНК, полученных при помощи ре-стриктазы Нра II, в точке 72 ед. карты от точки разрыва Е. coli RI, а 3´-конец — во фрагменте на расстоянии 25 — 26 ед. карты. Ядра из клеток ЗТЗ (пермиссивная система) через 30 ч после…

При составлении генетических карт онкогенных вариантов аденовирусов использовали те же самые экспериментальные подходы, что и для мелких ДНК-содержащих онковирусов. При действии рестриктазы Е. coli RI на ДНК аденовируса человека 2-го типа образуется 6 фрагментов, последовательность которых в геноме А2 известна. Обнаружено, что ранние мРНК, содержащие поли-А-последовательности, транскрибировались в основном с А-, В- и D-фрагментов ДНК…