9 июля 2012

Детерминированная трансформация

Фрагменты ДНК SV40, обладающие трансформирующей активностью, содержат один ранний А-ген, включающий 48% емкости генома.

Эндорестриктаза Нра I, которая вызывает разрыв в ранней области, блокирует трансформирующую активность генома SV40. Фрагмент В (0,375 — 0,735 ед. карты) составляет 36% генома и содержит около 60% его ранней области, кодирующей синтез полипептида с молекулярной массой 40 000 — 50 000, который обладает детерминантной группой Т-антигена (Graessman et al., 1976).

Аналогичные результаты получены и в отношении вируса PY: 35% ранней области генома, эквивалентной 1Х106, также достаточно для трансформации клетки (Grady et al., 1977).

Показано, что на ранних стадиях в клетках синтезируется только стабильная 19S мРНК, специфичная для SV40. На позднем этапе литической инфекции обнаружены два класса мРНК SV40 — 19S и 16S (Khoury et al., 1976).

Оказалось, что поздняя 19S мРНК менее стабильна, чем ранняя 19S мРНК. Поздняя 16S мРНК более стабильна, чем поздняя 19S мРНК в течение первых 3 ч инфекции, но к 5 ч ее пик достигал до уровня поздней 19S мРНК В классе 19S РНК выявлены два вида мРНК, один из которых комплементарен последовательностям, локализующимся в ранней области минус-Е-нити ДНК SV40 (от 0,175 до 0,655 ед. карты), а другой — в поздней области плюс-L-нити (от 0,655 до 0,175 ед. карты).

В классе 16S РНК также обнаружены два вида мРНК, один из которых, содержащий поли-А-последовательности, комплементарен последовательностям К-, F-, J- и G-фрагментов плюснити (от 0,945 до 0,175 ед. карты).

Этот участок ДНК SV40 кодируют главный капсидный полипептид VPI. Другой вид 16S мРНК, не содержащий поли-А-последовательностей, комплементарен фрагментам С, D и Е плюс-L-нити (от 0,655 до 0,945 ед. карты). Khoury и соавт. (1976) полагают, что этот вид мРНК может возникать в результате деградации 19S мРНК, комплементарных плюс-L-нити ДНК SV40.

Определена локализация генов, кодирующих три класса вирусспецифических мРНК, образующихся на разных стадиях литической инфекции вирусом полиомы. К этим мРНК относятся ранняя 19S, комплементарная ранней нити ДНК PY в участке 78 — 23 ед. карты, поздняя 19S, комплементарная 44% поздней нити ДНК PY в участке 70 — 26 ед. карты, поздняя 16S, комплементарная также поздней нити ДНК PY и транскрибируемая с 31% ее длины в участке 61 — 30 ед. карты.

Таким образом, поздняя 19S мРНК PY содержит все последовательности 16S мРНК, что также подтверждается данными двумерной хроматографии РНКазных гидролизатов этих двух вирусных мРНК (Türler et al., 1976).


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Установлена прямая пропорциональность между дозой различных агентов (митомицин С, бромдезоксиуридин, УФ- и 60Со-γ-облучение) и урожаем вируса, освобожденного из трансформированных клеток (Kaplan et al., 1975). Урожай вируса увеличивается по сравнению с контролем в 1000 — 10 000 раз. В линиях — продуцентах инфекционного SV40 доля индуцированных клеток составляла 2 — 6% (по данным определения продукции V-антигена…

Метод искусственных гетерокарионов оказался весьма эффективен для многих тест-систем клеток, трансформированных как РНК-, так и ДНК-содержащими онковирусами. В некоторых случаях индикаторные культуры использовали даже для титрования освобожденного вируса по фокусам трансформации, которые он индуцировал (Svoboda et al., 1975). Во всех этих экс-периментах чем больше был процент гетерокарионов, тем выше оказалась эффективность метода. Однако в системах,…

В экспериментах, проведенных А. И. Агеенко и соавт. (1975), из перевивных сарком (с 50-й по 60-ю генерацию), индуцированных у хомяков аденовирусом 12-го типа, полный инфекционный вирус выделялся постоянно. Обнаружено, что при заражении центрифугатами разрушенных клеток перевивных сарком культуры почки эмбриона человека (ПЭЧ) в среднем через 5 дней отмечалось начало цитогенного действия вируса. Из первичноиндуцированных сарком…

Клетки, трансформированные всеми исследованными в настоящее время онкогенными ДНК-содержащими вирусами, в основном являются непермиссивными для полного репродуктивного цикла трансформирующего их вируса, и поэтому естественно, что полный инфекционный вирус ими не продуцируется. Как известно, существуют два крайних ответа пермиссивных клеток природного хозяина при взаимодействии с геномом ДНК-содержащих онковирусов — лизис и трансформация. Трансформация осуществляется тогда, когда…

Итак, по характеру взаимоотношений онковируса с трансформированной клеткой можно выделить следующие типы опухолевых клеток. Вируспродуцирующие клетки. Как правило, это относится к РНК-содержащим вирусам. Вирогенные клетки, в которых удается активировать вирусный геном с помощью различных методических приемов (трансплантации их естественным хозяевам онковируса или при использовании «контактной индукции», т. е. прямого контакта опухолевой клетки с чувствительной «индикаторной»…