Лабораторные методы исследования

Для количественного определения изоферментов ЛДГ существует ряд методов, основанных на различии в апоферменте изозимов. Применяют методы электрофореза, хроматографии, термической инактивности и др. В клинике наиболее широко используется метод зонального электрофореза на агаровом геле с окрашиванием тетрахолиевыми солями, адсорбция на ДЗАЕ-целлюлозе и термическое инактивирование. Наиболее точны и надежны методы, основанные на электрофоретическом разделении изоферментов [Юрков Ю….

После окончания электрофореза пластинки перекладывают в специальную камеру для окраски, заливают красящую смесь и инкубируют в термостате 2 ч при 37 °С. Затем сливают смесь и несколько раз тщательно промывают агаровые пластинки дистиллированной водой. Сушку пластинок производят следующим образом: вырезанные по форме пластинки полоски хроматографической бумаги осторожно накладывают на агар, не сдвигая его. На чистую…

Общая активность ЛДГ в моче больных пиелонефритом в среднем достигает 37,5 ± 3,5 единицы Вроб-левского, но какой-либо зависимости ее от формы и степени тяжести пиелонефрита не отмечено. Перспективными для изучения при воспалительных заболеваниях почек являются ферменты малатдегидрогеназа (МДГ) и альдолаза (АЛД). МДГ относится к ферментам цикла Кребса, который катализирует обратимую реакцию окисления яблочной кислоты в…

Исследуемые сыворотки разводят 1:10 с помощью кроличьей сыворотки (в разведении 1:250), подогревают в электрической водяной бане при 54 °С в течение 20 мин (для разрушения комплемента) и охлаждают. Затем к ним добавляют формалинизированные или свежие эритроциты барана из расчета 0,2 мл на 1 мл сыворотки, содержимое пробирки встряхивают и помещают на 30 мин в термостат…

Приготовленные Аг разводят определенным количеством буфера (рН 6,4) и соединяют с раствором формалинизированных и танизированных эритроцитов в таком количестве, чтобы окончательное разведение Аг было 1:10. Установлено, что именно это разведение является оптимальным, так как не дает гемолиза или агглютинации эритроцитов в отсутствие специфической сыворотки. Содержимое колбочек встряхивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 1…

Свежевыпущенную мочу центрифугируют в течение 10 мин при 1500 об/мин, отсасывают надосадочную жидкость и осадок дважды промывают в изотоническом растворе хлорида натрия с фосфатным буфером (рН 7,3). В отмытый осадок добавляют 0,2 мл разведенной 1:5 люминесцирующей кроличьей сыворотки против глобулинов человека. Осадок мочи вместе с сывороткой инкубируют при 37 °С в течение 30 мин, после…

Проба Нечипоренко. Предложена в 1961 г. Производят подсчет форменных элементов осадка мочи в 1 мл мочи. Исследованию подвергают однократно собранную порцию мочи (чаще всего утреннюю порцию, но желательно производить исследование и в другие периоды для суждения о цикличности и характере воспалительного процесса). Можно исследовать и среднюю порцию мочи, что исключает попадание гнойного экссудата из нижних…

Канальцевый аппарат почек (в большей степени дистальные отделы) обладает способностью выделять кислые водородные ионы против концентрационного градиента. Осуществление этого процесса происходит только активным путем с участием ферментов (карбоангидраза, глутаминаза и др.). Образующиеся в результате химических реакций водородные ионы «обмениваются» на ионы натрия, поступающие в соединении с бикарбонатными ионами обратно в кровь (процессы ацидогенеза и аммониогенеза)….

Несмотря на достоинства описанных выше количественных методов подсчета форменных элементов, в частности лейкоцитурии, они не могут дать ответа на вопрос об источнике пиурии. Кроме того, при отсутствии активности воспалительного процесса или в стадии сморщивания почек пиурия может отсутствовать. В связи с этим продолжаются поиски методов, позволяющих выявлять отличительные особенности состава мочи в зависимости от патологии…

Титруемую кислотность мочи определяют титрованием ее 0,1 н. NaOH. Титрование продолжают до тех пор, пока рН мочи не достигнет величины рН плазмы крови (7,4). Конец титрования определяют выравниванием цвета мочи с исходным цветом буфера (в состав буфера входит моно- и дифосфат). Израсходованное на титрование количество щелочи делят на 10, умножают на суточное количество мочи. Таким…

В 1949 г. R. Sternheimer и В. Malbin впервые использовали специальный краситель для прямого окрашивания осадка мочи. Живой лейкоцит как коллоидная система с большим содержанием митохондрий, гранул-мицелл и находящейся между ними жидкостью по закону проницаемости способен пропускать красители и окрашиваться в тот или иной цвет. В зависимости от силы воздействия раздражителя способность протоплазмы клетки к…

Проба Вронга и Девиса дает возможность в условиях однократной ускоренной нагрузки хлоридом аммония (0,1 г/кг) в сравнительно короткий период (за 10 ч) получить сдвиг крови в сторону ацидоза и на этом фоне выявить способность почек к выведению кислых валентностей. Результат оценивается положительно, если хотя бы в одной пробе рН ниже 5,3, экскреция титруемых кислот 33…