13 марта 2009

Кислые гидролазы

Кислые гидролазы (β-глюкуро-нидаза, N-ацетил-α-D-глюкуронидаза) кислую фосфатазу (КФ) используют для диагностики волчаночного нефрита [Приваленко М. Н. и др., 1974; Каинова А. С. и др., 1977]. При гломерулонефрите повышается активность МДГ, Г-6-ФДГ, β-глюкуронидазы, лизоцима [Волкова Л. Д., 1974; Керимов Н. Б., Рустамов Я. К., 1975].

Наиболее широко в клинике применяют биохимические методы исследования ферментов в биологических жидкостях организма, так как гистохимическое изучение ферментов пока ограничено. При почечных заболеваниях изучение ферментов в моче имеет большее диагностическое значение, чем определение их в сыворотке крови. Особенно важно определение ферментов при динамическом наблюдении за больным, так как оно позволяет раньше, чем обычными лабораторными методами выявить характер патологии [Пугачева В. И., Юрков Ю. А., 1970; Шеметов В. Д., 1973; Клемина И. К., Леви Э. Б., 1976; Матвеев М. П. и др., 1980; Мошкина А. В. и др., 1980].

В нормальной моче человека обнаружено более 30 различных ферментов. Активность многих из них не определяется или очень незначительна. Нормальное содержание ферментов в моче свидетельствует об отсутствии поражения почек [Петрунь Н. М., 1977]. В литературе широко обсуждается вопрос о возможном источнике ферментурии, так как клеточные элементы крови и микроорганизмы в моче могут быть источником энзимурии [Габуния Д. Д. и др.. 1979].

Однако, как показали работы В. И. Пугачевой и Ю. А. Юркова (1972), в период клинико-лабораторной ремиссии при отсутствии в моче форменных элементов крови и микробов активность ферментов (ЛДГ) остается значительной, что указывает на пораженные ткани почек.

Новые возможности для использования показателей ферментативных процессов в качестве органоспецифических тестов возникли благодаря открытию изоферментов. Основанием для этого явилось установленное при изучении ЛДГ положение, что каждой ткани и органу животного организма соответствует постоянный спектр изоферментов.

Известно большое количество ферментов, существующих в многомолекулярной форме, но в клинической практике изучены только единичные. Отчетливое различие в распределении изоферментов в разных слоях почечной паренхимы послужило предпосылкой для использования этого теста в диагностике ряда почечных заболеваний. Большое диагностическое значение придают изучению изоферментного спектра ЛДГ, МДГ, альдолазы, аминотрансферазы и гидролазы.

«Детская урология», Н.А. Лопаткин



Исследуемые сыворотки разводят 1:10 с помощью кроличьей сыворотки (в разведении 1:250), подогревают в электрической водяной бане при 54 °С в течение 20 мин (для разрушения комплемента) и охлаждают. Затем к ним добавляют формалинизированные или свежие эритроциты барана из расчета 0,2 мл на 1 мл сыворотки, содержимое пробирки встряхивают и помещают на 30 мин в термостат…

Приготовленные Аг разводят определенным количеством буфера (рН 6,4) и соединяют с раствором формалинизированных и танизированных эритроцитов в таком количестве, чтобы окончательное разведение Аг было 1:10. Установлено, что именно это разведение является оптимальным, так как не дает гемолиза или агглютинации эритроцитов в отсутствие специфической сыворотки. Содержимое колбочек встряхивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 1…

Свежевыпущенную мочу центрифугируют в течение 10 мин при 1500 об/мин, отсасывают надосадочную жидкость и осадок дважды промывают в изотоническом растворе хлорида натрия с фосфатным буфером (рН 7,3). В отмытый осадок добавляют 0,2 мл разведенной 1:5 люминесцирующей кроличьей сыворотки против глобулинов человека. Осадок мочи вместе с сывороткой инкубируют при 37 °С в течение 30 мин, после…

Для количественного определения изоферментов ЛДГ существует ряд методов, основанных на различии в апоферменте изозимов. Применяют методы электрофореза, хроматографии, термической инактивности и др. В клинике наиболее широко используется метод зонального электрофореза на агаровом геле с окрашиванием тетрахолиевыми солями, адсорбция на ДЗАЕ-целлюлозе и термическое инактивирование. Наиболее точны и надежны методы, основанные на электрофоретическом разделении изоферментов [Юрков Ю….

После окончания электрофореза пластинки перекладывают в специальную камеру для окраски, заливают красящую смесь и инкубируют в термостате 2 ч при 37 °С. Затем сливают смесь и несколько раз тщательно промывают агаровые пластинки дистиллированной водой. Сушку пластинок производят следующим образом: вырезанные по форме пластинки полоски хроматографической бумаги осторожно накладывают на агар, не сдвигая его. На чистую…