Определение креатинина в сыворотке крови
Для проведения пробы необходимы реактивы: 1,2% раствор пикриновой кислоты, 10% раствор едкого натрия и стандартный раствор креатинина (100 мг креатинина растворяют в 100 мл 0,1% раствора хлористоводородной кислоты). Из этого основного раствора готовят рабочим путем разведения 1 мл основного раствора в 100 мл дистиллированной воды. 1 мл рабочего раствора содержит 0,1 мл креатинина (исследование производят в фотоэлектроколориметре).
Методика
В пробирку последовательно вносят 0,75 мл негемоли-зированной сыворотки, 0,75 мл дистиллированной воды и 4,5 мл 1,2% раствора пикриновой кислоты. Смешивают и ставят на 10 минут в водяную баню. После охлаждения центрифугируют при 2500 — 3000 об/мин в течение 5 мин. К 4 мл центрифугата добавляют 0,2 мл 10% раствора едкого натра и 0,8 мл дистиллированной воды. Смешивают.
Готовят контрольную пробу (к 3 мл 1,2% раствора пикриновой кислоты добавляют 0,2 мл 10% раствора едкого натра и 1,8 мл дистиллированной воды) и стандартную пробу (0,5 мл рабочего раствора, 0,2 мл 10% раствора едкого натра, 1,3 мл дистиллированной воды, 3 мл 1,2% раствора пикриновой кислоты). Все три пробы выдерживают в течение 20 мин при комнатной температуре, после чего фотометрируют при длине волны 500 — 560 нм (зеленый светофильтр) в кюветах с рабочим расстоянием 1 см против контроля.
Расчет производят по формуле: (Э0*0,005*200)/Эс=Э0/Эс,
где:
-
Э0 — экстинция опыта;
-
Эс — экстинция стандарта;
-
0,005 — количество креатина в стандартной пробе (мг);
-
200 — разведение сыворотки.
В норме содержание креатинина в сыворотке крови здоровых людей составляет 0,044 — 0,088 ммоль/л (0,4 — 1,2 мг%).
Клиренс эндогенного креатинина, приведенный к стандартной поверхности тела (1,73 м2)
| Возраст | Клиренс креатинина | |
| мл/мин | мл/с | |
| 0 — 14 дней 14 дней 2 мес — 1 год Старше 1 года Взрослые |
30 (25 — 35) 37 (25 — 55) 60 (35 — 80) 80 (60 — 100) 100 (80 — 150) |
0,5 (0,31 — 0,47) 0,61 (0,31 — 0,81) 1,0 (0,47 — 1,3) 1,3 (1,0 — 1,6) 1,6 (1,3— 2,4) |
«Детская урология», Н.А. Лопаткин
Исследуемые сыворотки разводят 1:10 с помощью кроличьей сыворотки (в разведении 1:250), подогревают в электрической водяной бане при 54 °С в течение 20 мин (для разрушения комплемента) и охлаждают. Затем к ним добавляют формалинизированные или свежие эритроциты барана из расчета 0,2 мл на 1 мл сыворотки, содержимое пробирки встряхивают и помещают на 30 мин в термостат…
Приготовленные Аг разводят определенным количеством буфера (рН 6,4) и соединяют с раствором формалинизированных и танизированных эритроцитов в таком количестве, чтобы окончательное разведение Аг было 1:10. Установлено, что именно это разведение является оптимальным, так как не дает гемолиза или агглютинации эритроцитов в отсутствие специфической сыворотки. Содержимое колбочек встряхивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 1…
Свежевыпущенную мочу центрифугируют в течение 10 мин при 1500 об/мин, отсасывают надосадочную жидкость и осадок дважды промывают в изотоническом растворе хлорида натрия с фосфатным буфером (рН 7,3). В отмытый осадок добавляют 0,2 мл разведенной 1:5 люминесцирующей кроличьей сыворотки против глобулинов человека. Осадок мочи вместе с сывороткой инкубируют при 37 °С в течение 30 мин, после…
Для количественного определения изоферментов ЛДГ существует ряд методов, основанных на различии в апоферменте изозимов. Применяют методы электрофореза, хроматографии, термической инактивности и др. В клинике наиболее широко используется метод зонального электрофореза на агаровом геле с окрашиванием тетрахолиевыми солями, адсорбция на ДЗАЕ-целлюлозе и термическое инактивирование. Наиболее точны и надежны методы, основанные на электрофоретическом разделении изоферментов [Юрков Ю….
После окончания электрофореза пластинки перекладывают в специальную камеру для окраски, заливают красящую смесь и инкубируют в термостате 2 ч при 37 °С. Затем сливают смесь и несколько раз тщательно промывают агаровые пластинки дистиллированной водой. Сушку пластинок производят следующим образом: вырезанные по форме пластинки полоски хроматографической бумаги осторожно накладывают на агар, не сдвигая его. На чистую…
