13 марта 2009

Определение креатинина в сыворотке крови

Для проведения пробы необходимы реактивы: 1,2% раствор пикриновой кислоты, 10% раствор едкого натрия и стандартный раствор креатинина (100 мг креатинина растворяют в 100 мл 0,1% раствора хлористоводородной кислоты). Из этого основного раствора готовят рабочим путем разведения 1 мл основного раствора в 100 мл дистиллированной воды. 1 мл рабочего раствора содержит 0,1 мл креатинина (исследование производят в фотоэлектроколориметре).

Методика

В пробирку последовательно вносят 0,75 мл негемоли-зированной сыворотки, 0,75 мл дистиллированной воды и 4,5 мл 1,2% раствора пикриновой кислоты. Смешивают и ставят на 10 минут в водяную баню. После охлаждения центрифугируют при 2500 — 3000 об/мин в течение 5 мин. К 4 мл центрифугата добавляют 0,2 мл 10% раствора едкого натра и 0,8 мл дистиллированной воды. Смешивают.

Готовят контрольную пробу (к 3 мл 1,2% раствора пикриновой кислоты добавляют 0,2 мл 10% раствора едкого натра и 1,8 мл дистиллированной воды) и стандартную пробу (0,5 мл рабочего раствора, 0,2 мл 10% раствора едкого натра, 1,3 мл дистиллированной воды, 3 мл 1,2% раствора пикриновой кислоты). Все три пробы выдерживают в течение 20 мин при комнатной температуре, после чего фотометрируют при длине волны 500 — 560 нм (зеленый светофильтр) в кюветах с рабочим расстоянием 1 см против контроля.

Расчет производят по формуле: 0*0,005*200)/Эс0с,

где:

  • Э0 — экстинция опыта;
  • Эс — экстинция стандарта;
  • 0,005 — количество креатина в стандартной пробе (мг);
  • 200 — разведение сыворотки.

В норме содержание креатинина в сыворотке крови здоровых людей составляет 0,044 — 0,088 ммоль/л (0,4 — 1,2 мг%).

Клиренс эндогенного креатинина, приведенный к стандартной поверхности тела (1,73 м2)

Возраст Клиренс креатинина
мл/мин мл/с
0 — 14 дней
14 дней
2 мес — 1 год
Старше 1 года
Взрослые
30 (25 — 35)
37 (25 — 55)
60 (35 — 80)
80 (60 — 100)
100 (80 — 150)
0,5 (0,31 — 0,47)
0,61 (0,31 — 0,81)
1,0 (0,47 — 1,3)
1,3 (1,0 — 1,6)
1,6 (1,3— 2,4)

«Детская урология», Н.А. Лопаткин



Для количественного определения изоферментов ЛДГ существует ряд методов, основанных на различии в апоферменте изозимов. Применяют методы электрофореза, хроматографии, термической инактивности и др. В клинике наиболее широко используется метод зонального электрофореза на агаровом геле с окрашиванием тетрахолиевыми солями, адсорбция на ДЗАЕ-целлюлозе и термическое инактивирование. Наиболее точны и надежны методы, основанные на электрофоретическом разделении изоферментов [Юрков Ю….

После окончания электрофореза пластинки перекладывают в специальную камеру для окраски, заливают красящую смесь и инкубируют в термостате 2 ч при 37 °С. Затем сливают смесь и несколько раз тщательно промывают агаровые пластинки дистиллированной водой. Сушку пластинок производят следующим образом: вырезанные по форме пластинки полоски хроматографической бумаги осторожно накладывают на агар, не сдвигая его. На чистую…

Общая активность ЛДГ в моче больных пиелонефритом в среднем достигает 37,5 ± 3,5 единицы Вроб-левского, но какой-либо зависимости ее от формы и степени тяжести пиелонефрита не отмечено. Перспективными для изучения при воспалительных заболеваниях почек являются ферменты малатдегидрогеназа (МДГ) и альдолаза (АЛД). МДГ относится к ферментам цикла Кребса, который катализирует обратимую реакцию окисления яблочной кислоты в…

Исследуемые сыворотки разводят 1:10 с помощью кроличьей сыворотки (в разведении 1:250), подогревают в электрической водяной бане при 54 °С в течение 20 мин (для разрушения комплемента) и охлаждают. Затем к ним добавляют формалинизированные или свежие эритроциты барана из расчета 0,2 мл на 1 мл сыворотки, содержимое пробирки встряхивают и помещают на 30 мин в термостат…

Приготовленные Аг разводят определенным количеством буфера (рН 6,4) и соединяют с раствором формалинизированных и танизированных эритроцитов в таком количестве, чтобы окончательное разведение Аг было 1:10. Установлено, что именно это разведение является оптимальным, так как не дает гемолиза или агглютинации эритроцитов в отсутствие специфической сыворотки. Содержимое колбочек встряхивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 1…