10 марта 2009

Дегрануляция тучных клеток, соединительной ткани

При выполнении теста Шелли приходится сталкиваться с рядом трудностей: получение хорошей лейкоцитарной пленки, взятие крови у одного и того же кролика не чаще 1 раза в неделю, нестойкость и склонность базофилов к спонтанной деструкции. В связи с этим в последнее время все шире используют тучные клетки крысы.

Методика

Необходимо получить взвесь тучных клеток. Интактную крысу обезглавливают. Внутрибрюшинно. вводят 5 — 7 мл изотонического раствора хлорида натрия или раствора Тироде, подогретого до 37 °С. Брюшко слегка массируют в течение 15 мин. Затем брюшную полость вскрывают, ее содержимое стекает в пробирку, нагретую до 37 °С и смоченную гепарином. Полученную взвесь, содержащую тучные клетки, необходимо держать в термостате при 37 °С все время исследования.

До начала опыта, который ставится аналогично тесту Шелли, необходимо просмотреть один препарат (взвесь тучных клеток, нанесенную на предварительно окрашенное нейтральным красным предметное стекло). Если в препарате много спонтанно дегранулированных тучных клеток, то тучные клетки этой крысы использовать в опыте нельзя.

Результаты теста определяют так же, как и предыдущего (тест Шелли), по проценту измененных тучных клеток, но просматривают больше клеток (50 — 100). Положительным считается результат больше 10% без деструкции в контроле (0 — 3%).

Тест торможения прямой дегрануляции тучных клеток ставится с тучными клетками предварительно сенсибилизированной крысы. В реакции участвуют сенсибилизированные тучные клетки перитонеальной жидкости крыс, исследуемая сыворотка и аллерген.

Взвесь сенсибилизированных тучных клеток наносят на заранее окрашенное предметное стекло (нейтральный красный), добавляют каплю (0,05 мл) аллергена. Получается прямой тест дегрануляции тучных клеток. Результаты реакции читают через 10 — 15 мин пребывания препарата в термостате. Подсчитывают процент дегранулированных клеток.

Далее на каждое предметное стекло серии наносят одно разведение исследуемой сыворотки, каплю аллергена и каплю сенсибилизированных тучных клеток крысы и так же подсчитывают процент дегранулированных клеток. Результаты сравнивают с данными прямого теста. За титр принимают разведение сыворотки больного, способное тормозить дегрануляцию тучных клеток сенсибилизированного животного.

«Аллергические болезни у детей», проф. М.Я.Студеникин

Читайте далее:



Назальный тест Проводится преимущественно при поплинозах с ринитом и аллергическом рините другой этиологии. Противопоказания для проведения пробы те же, что и для кожных проб. В одну половину носа пипеткой вводят 2 капли тест-контрольной жидкости. Если в течение 10 — 15 мин нет реакции, то можно начать исследование с аллергеном. В другую ноздрю вводят 2 капли…

Лабораторная диагностика в аллергологии имеет ряд преимуществ перед клиническими методами, так как не связана с введением аллергена высокосенсибилизированному больному. Если необходимо срочное выявление аллергена для его элиминации (при пищевой и медикаментозной аллергии) или болезнь непрерывно рецидивирует, то лабораторные методы приобретают первостепенное значение. Их применение оправдано и тогда, когда больной находится в тяжелом состоянии, получает антигистаминные…

Реакция связывания комплемента (РСК) использовалась преимущественно в диагностике пищевой аллергии. Недостатком метода является обязательное прогревание сыворотки для уничтожения антикомплементарности что может вызвать гибель термолабильных антител-реагинов [Hanson, 1965]. Реакция преципитации. Метод обнаружения циркулирующих антител, основанный на реакции преципитации в геле (агаре), где антиген и соответствующее ему антитело диффундируют по направлению друг к другу с различной скоростью….

Радиоаллерго-сорбентный тест — PACT. В последние годы разработан метод выявления специфических антител различных классов в сыворотках больных аллергическими болезнями. В 1967 г. Wide, Bennich, Johansson нашли способ обнаружения специфических антител класса IgE к неинфекционным аллергенам. Оказалось, что концентрация IgE в сыворотке у больных поллинозом и бронхиальной астмой выше, чем у лиц контрольной группы. На этом…

В литературе, посвященной общим вопросам аллергии и патогенеза аллергического процесса, большое место уделяется роли клеточных элементов крови в аллергических реакциях. Клетки крови могут быть носителями антител (лимфоциты), могут фиксировать на себе комплекс антиген — антитело (тромбоциты, эритроциты, зернистые лейкоциты, базофилы). На этих свойствах клеток крови основаны некоторые методы лабораторной диагностики. Тест дегрануляции базофильных лейкоцитов. В…