Использование реакции элементов крови для диагностики аллергии

В литературе, посвященной общим вопросам аллергии и патогенеза аллергического процесса, большое место уделяется роли клеточных элементов крови в аллергических реакциях.

Клетки крови могут быть носителями антител (лимфоциты), могут фиксировать на себе комплекс антиген — антитело (тромбоциты, эритроциты, зернистые лейкоциты, базофилы). На этих свойствах клеток крови основаны некоторые методы лабораторной диагностики.

Тест дегрануляции базофильных лейкоцитов. В ряде работ убедительно показано, что базофилы крови и тканевые тучные клетки, участвуя в аллергических реакциях преимущественно немедленного (химергического) типа, подвергаются альтерации, дегрануляции и даже лизису, что сопровождается выделением биологически активных веществ. Shelley в 1962 г. предложен диагностический тест, основанный на изменении формы базофилов в присутствии комплекса антиген — антитело, который впоследствии получил название теста Шелли.

Существует прямая и непрямая реакция. Прямая реакция ставится на базофильных лейкоцитах больного аллергией. Однако этот метод требует большого количества крови больного, так как базофилов в крови человека немного (0,3 — 0,4%). Предварительно проводится лейкоконцентрация.

В детской практике диагностика пищевой аллергии производится с помощью непрямого теста Шелли. В крови кроликов много базофилов (4 — 12%). Непрямой тест ставится на изолированных базофилах интактных кроликов. Кровь с гепарином, взятая из ушной вены кролика, центрифугируется в узких пробирках в течение 5 мин при 3000 об/мин. Затем отсасывают беловатую лейкоцитарную пленку между плазмой и эритроцитной взвесью.

Предварительно на предметное стекло наносят каплю 0,3% спиртового раствора нейтрального красного. На подсохший краситель помещают каплю (0,05 мл) сыворотки больного, каплю базофильной (кроличья) пленки и каплю аллергена. Параллельно ставят контроль с аллергеном без сыворотки больного и с сывороткой, но без аллергена. Предметное стекло после осторожного помешивания смеси накрывают покровным и подсчитывают базофилы. О результатах реакции судят по числу дегранулированных базофилов (под микроскопом при увеличении 600). Просматривают 20 или 40 клеток в различных полях зрения. Учитывается процент измененных базофилов. Основным критерием теста Шелли являются изменения формы клеток (грушевидные, вытянутые, с псевдоподиями).

В цитоплазме базофилов определяются вакуоли, а вокруг клеток — гранулы. Показатель более 10 — 15% считается положительным результатом. Процент дегранулированных базофилов в контроле не должен превышать 2 — 3.

А. А. Польнер выделяет 3 стадии реакции Шелли:

• латентный период (10 — 15 мин);
• период активации (15 — 20 мин);
• возвращение клетки в состояние относительного покоя.

При явной повышенной чувствительности к тому или иному аллергену тест иногда бывает отрицательным, что связано с разведением аллергена, причем это не всегда максимальные концентрации. Иногда тест бывает положительным при очень низких концентрациях аллергена, а при высоких не происходит деструкции базофилов.

«Аллергические болезни у детей», проф. М.Я.Студеникин