13 марта 2009

Определение аминокислот в моче

В проксимальных канальцах аминокислоты подвергаются активной и интенсивной реабсорбции, требующей больших энергетических затрат при участии многих ферментных систем. Почти все свободные аминокислоты, профильтровавшиеся в просвет канальца, реабсорбируются обратно.

Однако указанный механизм ограничивается величиной Т макс (максимальный порог), при котором устанавливается постоянная максимальная концентрация веществ, в результате чего реабсорбция прекращается и аминокислоты экскретируются с мочой. Клиренс большинства аминокислот колеблется в пределах 1 — 2 мл/мин.

Имеются аминокислоты и с большими величинами клиренса (более 2 — 4 мл/мин): глицин, гистидин, цистин и др. В клинической практике применяются методы определения общего азота аминокислот в моче и отдельных аминокислот. Различают генерализованную аминоацидурию, при которой наблюдается повышенная экскреция большинства аминокислот, и селективную, при которой происходит потеря одной аминокислоты. Снижение содержания аминокислот в крови наблюдается при многих заболеваниях, в том числе при тяжелой патологии почек как врожденного, так и приобретенного характера.

Известны заболевания наследственного характера, в основе которых лежит нарушение транспортных систем отдельных аминокислот, составляющих основу патофизиологического процесса (цистинурия, болезнь Хартнапа, синдром Дебре — де Тони — Фан-кони и др.).

Определение общего азота аминокислот можно произвести несколькими способами (газометрический способ по Ван-Слайку, тимоловое титрование по методу Зеренсена, колориметрический метод определения нингидрином и др.). В клинической практике наиболее широко применяют колориметрический способ с нингидрином. В основе его лежит реакция нингидрина с аминогруппой аминокислот, в результате которой получают фиолетовое окрашивание раствора. По интенсивности окраски судят о количестве азота аминокислот.

«Детская урология», Н.А. Лопаткин



Для количественного определения изоферментов ЛДГ существует ряд методов, основанных на различии в апоферменте изозимов. Применяют методы электрофореза, хроматографии, термической инактивности и др. В клинике наиболее широко используется метод зонального электрофореза на агаровом геле с окрашиванием тетрахолиевыми солями, адсорбция на ДЗАЕ-целлюлозе и термическое инактивирование. Наиболее точны и надежны методы, основанные на электрофоретическом разделении изоферментов [Юрков Ю….

После окончания электрофореза пластинки перекладывают в специальную камеру для окраски, заливают красящую смесь и инкубируют в термостате 2 ч при 37 °С. Затем сливают смесь и несколько раз тщательно промывают агаровые пластинки дистиллированной водой. Сушку пластинок производят следующим образом: вырезанные по форме пластинки полоски хроматографической бумаги осторожно накладывают на агар, не сдвигая его. На чистую…

Общая активность ЛДГ в моче больных пиелонефритом в среднем достигает 37,5 ± 3,5 единицы Вроб-левского, но какой-либо зависимости ее от формы и степени тяжести пиелонефрита не отмечено. Перспективными для изучения при воспалительных заболеваниях почек являются ферменты малатдегидрогеназа (МДГ) и альдолаза (АЛД). МДГ относится к ферментам цикла Кребса, который катализирует обратимую реакцию окисления яблочной кислоты в…

Исследуемые сыворотки разводят 1:10 с помощью кроличьей сыворотки (в разведении 1:250), подогревают в электрической водяной бане при 54 °С в течение 20 мин (для разрушения комплемента) и охлаждают. Затем к ним добавляют формалинизированные или свежие эритроциты барана из расчета 0,2 мл на 1 мл сыворотки, содержимое пробирки встряхивают и помещают на 30 мин в термостат…

Приготовленные Аг разводят определенным количеством буфера (рН 6,4) и соединяют с раствором формалинизированных и танизированных эритроцитов в таком количестве, чтобы окончательное разведение Аг было 1:10. Установлено, что именно это разведение является оптимальным, так как не дает гемолиза или агглютинации эритроцитов в отсутствие специфической сыворотки. Содержимое колбочек встряхивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 1…