Иммунофлюоресцентное окрашивание клеток

Иммунологические исследования свидетельствуют о возможной связи ИБВ с этиологией или патогенезом ЛБ. А. Henle и С. Henle (1966, 1967) использовали для изучения антигенов лимфобластов различных культур ЛБ метод непрямой РИФ фиксированных клеток. Было установлено, что клетки, инфицированные ИБВ, легко определяются с помощью этого метода.

Положительная реакция наблюдалась со всеми сыворотками больных ЛБ, причем титр антител был достаточно высоким (1:100 — 1:1000). Около половины контрольных сывороток здоровых детей, проживающих в тех областях Африки, где преимущественно встречается ЛБ, также дало положительный результат, однако большинство этих сывороток имело низкий титр антител. Сходным образом реагировали сыворотки детей из Америки.

При использовании сывороток с неидентифицированной вирусной инфекцией в острой стадии и в период выздоровления были получены отрицательные результаты.

Авторы представили данные, свидетельствующие о том, что в их опытах иммунофлюоресцентному окрашиванию подвергались клетки, содержащие ИБВ, и что антитела были направлены против капсида этого вируса:

• при электронной микроскопии процент клеток, содержащих ИБВ, в различных линиях ЛБ был близок проценту иммунофлюоресцирующих клеток;
• манипуляция с культурами, которые уменьшают или увеличивают процент флюоресцирующих клеток, в равной степени уменьшает или увеличивает процент клеток, содержащих герпесоподобные частицы, определяемые при электронной микроскопии;
• сыворотки, обусловливающие сильную РИФ, содержат антитела к вирусному капсиду, что было показано путем агглютинации ИБВ под электронным микроскопом;
• при радиоаутографии через 1 — 2 дня после метки 3Н-тимидином большая часть флюоресцирующих клеток содержит изотоп в цитоплазме (вирусная ДНК), в то время как в нефлюоресцирующих клетках метка ограничивается ядром;
• индивидуальные флюоресцирующие клетки, выделенные из культур, содержат большое количество герпесоподобных вирусных частиц, которые не определяются в нефлюоресцирующих клетках. Авторы считают, что РИФ, обусловленная ИБВ-антигенами, отличается от РИФ периферических лейкозных клеток, так как конъюгированные с флюоресцеином антисыворотки к «пилюлям» плазм больных лейкозом не окрашивали клеток стабильных культур ЛБ, поддерживаемых в их лаборатории.

ИБВ-антигены отличаются также от поверхностных антигенов, которые были обнаружены в биопсийном материале или клетках стабильных культур ЛБ с помощью метода мембранной РИФ.

Как правило, биопсированные клетки и молодые культуры сильно реагировали в тесте мембранной РИФ, однако давали слабую реакцию или совсем не реагировали в тесте определения ИБВ-антигенов и, наоборот, в стабильных культурах выявлялось относительно большое количество клеток, содержащих антигены вирусного капсида, которые не окрашивались в опытах мембранной РИФ (Klein et al., 1968).

Показано, что ИБВ геном всегда присутствует во всех стабильных линиях лимфобластоидных клеток с маркерами В-клеток и отсутствует в линиях миеломных клеток.

«Иммунология и иммунотерапия лейкоза»,
В.М.Бергольц, Н.С.Кисляк, В.С.Еремеев