25 января 2011

Иммунофлюоресцентное окрашивание клеток

Иммунологические исследования свидетельствуют о возможной связи ИБВ с этиологией или патогенезом ЛБ. А. Henle и С. Henle (1966, 1967) использовали для изучения антигенов лимфобластов различных культур ЛБ метод непрямой РИФ фиксированных клеток. Было установлено, что клетки, инфицированные ИБВ, легко определяются с помощью этого метода.

Положительная реакция наблюдалась со всеми сыворотками больных ЛБ, причем титр антител был достаточно высоким (1:100 — 1:1000). Около половины контрольных сывороток здоровых детей, проживающих в тех областях Африки, где преимущественно встречается ЛБ, также дало положительный результат, однако большинство этих сывороток имело низкий титр антител. Сходным образом реагировали сыворотки детей из Америки.

При использовании сывороток с неидентифицированной вирусной инфекцией в острой стадии и в период выздоровления были получены отрицательные результаты.

Авторы представили данные, свидетельствующие о том, что в их опытах иммунофлюоресцентному окрашиванию подвергались клетки, содержащие ИБВ, и что антитела были направлены против капсида этого вируса:

  • при электронной микроскопии процент клеток, содержащих ИБВ, в различных линиях ЛБ был близок проценту иммунофлюоресцирующих клеток;
  • манипуляция с культурами, которые уменьшают или увеличивают процент флюоресцирующих клеток, в равной степени уменьшает или увеличивает процент клеток, содержащих герпесоподобные частицы, определяемые при электронной микроскопии;
  • сыворотки, обусловливающие сильную РИФ, содержат антитела к вирусному капсиду, что было показано путем агглютинации ИБВ под электронным микроскопом;
  • при радиоаутографии через 1 — 2 дня после метки 3Н-тимидином большая часть флюоресцирующих клеток содержит изотоп в цитоплазме (вирусная ДНК), в то время как в нефлюоресцирующих клетках метка ограничивается ядром;
  • индивидуальные флюоресцирующие клетки, выделенные из культур, содержат большое количество герпесоподобных вирусных частиц, которые не определяются в нефлюоресцирующих клетках. Авторы считают, что РИФ, обусловленная ИБВ-антигенами, отличается от РИФ периферических лейкозных клеток, так как конъюгированные с флюоресцеином антисыворотки к «пилюлям» плазм больных лейкозом не окрашивали клеток стабильных культур ЛБ, поддерживаемых в их лаборатории.

ИБВ-антигены отличаются также от поверхностных антигенов, которые были обнаружены в биопсийном материале или клетках стабильных культур ЛБ с помощью метода мембранной РИФ.

Как правило, биопсированные клетки и молодые культуры сильно реагировали в тесте мембранной РИФ, однако давали слабую реакцию или совсем не реагировали в тесте определения ИБВ-антигенов и, наоборот, в стабильных культурах выявлялось относительно большое количество клеток, содержащих антигены вирусного капсида, которые не окрашивались в опытах мембранной РИФ (Klein et al., 1968).

Показано, что ИБВ геном всегда присутствует во всех стабильных линиях лимфобластоидных клеток с маркерами В-клеток и отсутствует в линиях миеломных клеток.

«Иммунология и иммунотерапия лейкоза»,
В.М.Бергольц, Н.С.Кисляк, В.С.Еремеев

Читайте далее:



Механизм действия ПАФ при лейкемогенезе

Мы изучали механизм действия ПАФ при лейкемогенезе, вызванном BP, с помощью одновременного применения методов ауторадиографии, РИФ, анализа антител образующей способности клеток селезенки и цитологии. Результаты анализа пролиферативной активности клеток селезенки мышей линий BALB и C57BL/6 в разные сроки после заражения животных BP, введения ПАФ или комбинированного воздействия обоими антигенами представлены на рисунке. Из данных рисунка…

Поскольку вирус лейкоза человека еще не выделен в чистом виде, некоторые данные о природе лейкозогенного агента, содержащегося в тканях при лейкозе, могут быть получены, вероятно, при сравнительном изучении антигенных свойств лейкозных тканей человека и мышей. По вопросу выявления общих антигенов при лейкозах человека и мышей имеется всего лишь несколько работ. В них авторы сообщают, что…

В работе Whitson и соавт. (1976) кроличья антисыворотка против клеток линии миелолейкоза человека, содержащих филадельфийскую хромосому, оказала специфическое ЦТД на клетки 10 больных хроническим и 3 больных острым миелолейкозом. Лейкоциты одного из 4 больных острым и 3 из 7 ХЛЛ имели подобные же антигенные детерминанты. С помощью лошадиной антисыворотки к бластным клеткам ХМЛ удалось обнаружить…

В селезенке резистентной линии мышей введение ПАФ не вызывает снижение величины индекса метки в течение всего срока исследования, т. е. 28 дней. Более того, на 7, 14 и 21-й день имеет место увеличение числа пролиферирующих клеток примерно в 1,5 раза. Наконец, изучение пролиферативной активности в селезенке животных, которым через 3 дня после заражения, вирусом вводили…

Можно высказать четыре предположения о природе антигенной общности лейкозных тканей человека и мышей. Во-первых, в лейкозных тканях человека и мышей появляются «патологические» белки, имеющие сходные антигенные детерминанты и играющие какуюто роль в патогенезе лейкозов. Во-вторых, лейкозные ткани человека и мышей содержат причинные агенты, обладающие близкими антигенными свойствами. В-третьих, нормальные и лейкозные ткани человека и мышей…