13 марта 2009

Проба Вронга и Девиса

Проба Вронга и Девиса дает возможность в условиях однократной ускоренной нагрузки хлоридом аммония (0,1 г/кг) в сравнительно короткий период (за 10 ч) получить сдвиг крови в сторону ацидоза и на этом фоне выявить способность почек к выведению кислых валентностей. Результат оценивается положительно, если хотя бы в одной пробе рН ниже 5,3, экскреция титруемых кислот 33 — 111 мкмоль/мин и аммиака 42 — 100 мкмоль/мин.

Исследование ферментов в крови и моче при заболеваниях почек. С помощью современных методов исследования, включая электронную микроскопию, цито- и гистохимические методы, удалось обнаружить в клетках нефрона, особенно митохондриях, различные ферменты:

  • ферменты гидролитического ряда — кислую и щелочную фосфатазу;
  • ферменты гликолиза — гексокиназу и лактатдегидрогеназу;
  • ферменты, участвующие в цикле Кребса — сукциндегидрогеназу;
  • фермент гексозомонофосфатного пути обмена глюкозы — глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу и др. [Петрунь Н. М. и др., 1973; Клемина И. К и др., 1976; Phillppson С, 1976, и др.].

Повреждение ткани патологическим процессом влечет за собой глубокие нарушения жизнедеятельности клеток, сопровождающиеся выходом внутриклеточных ферментов в жидкостные среды организма.

В настоящее время имеются далеко не полные сведения о ферментативной топографии нефрона. Исследования нефрона человека и животных показали, что в отдельных его частях имеется высокая ферментативная дифференциация, тесно Связанная с функциями, которые выполняет каждый отдел. Более богата ферментами канальцевая часть нефрона, в которой осуществляется активный транспорт биологических веществ. Последнее обстоятельство может служить основанием для исследования ферментов с целью изучения пиелонефрита, при котором первично поражается канальцевый дистальный отдел почки. Некоторые ферменты с успехом можно использовать при специфических заболеваниях почек.

Например, трансаминаза поджелудочной железы определяется в моче только при поражении почек: гломерулонефрите (нефротическая форма), пиелонефрите, амилонефрите, амилоидозе почек, острой почечной недостаточности) и поджелудочной железы [Мардашев с. Р. Карелин А. А., 1970]. При гломерулярной патологии и патологии извитых канальцев почек наибольшее значение имеет лейцинаминопептидаза (ЛАП), так как содержание ее в клубочках и указанных отделах канальцев наиболее высоко [Шепотиновский В. И. и др., 1980; Duch E., 1972], при пиелонефрите — лактатдегидрогеназа (ЛДГ), глутаминаза, аспарагиназа [Пугачева В. И., 1972; Матвеев М. П. и др., 1980], сукциндегидрогеназа (СДГ), кислая фосфатаза [Ситникова В. П. и др., 1980; Лысоченко В. А. и др., 1980].

«Детская урология», Н.А. Лопаткин



Для количественного определения изоферментов ЛДГ существует ряд методов, основанных на различии в апоферменте изозимов. Применяют методы электрофореза, хроматографии, термической инактивности и др. В клинике наиболее широко используется метод зонального электрофореза на агаровом геле с окрашиванием тетрахолиевыми солями, адсорбция на ДЗАЕ-целлюлозе и термическое инактивирование. Наиболее точны и надежны методы, основанные на электрофоретическом разделении изоферментов [Юрков Ю….

После окончания электрофореза пластинки перекладывают в специальную камеру для окраски, заливают красящую смесь и инкубируют в термостате 2 ч при 37 °С. Затем сливают смесь и несколько раз тщательно промывают агаровые пластинки дистиллированной водой. Сушку пластинок производят следующим образом: вырезанные по форме пластинки полоски хроматографической бумаги осторожно накладывают на агар, не сдвигая его. На чистую…

Общая активность ЛДГ в моче больных пиелонефритом в среднем достигает 37,5 ± 3,5 единицы Вроб-левского, но какой-либо зависимости ее от формы и степени тяжести пиелонефрита не отмечено. Перспективными для изучения при воспалительных заболеваниях почек являются ферменты малатдегидрогеназа (МДГ) и альдолаза (АЛД). МДГ относится к ферментам цикла Кребса, который катализирует обратимую реакцию окисления яблочной кислоты в…

Исследуемые сыворотки разводят 1:10 с помощью кроличьей сыворотки (в разведении 1:250), подогревают в электрической водяной бане при 54 °С в течение 20 мин (для разрушения комплемента) и охлаждают. Затем к ним добавляют формалинизированные или свежие эритроциты барана из расчета 0,2 мл на 1 мл сыворотки, содержимое пробирки встряхивают и помещают на 30 мин в термостат…

Приготовленные Аг разводят определенным количеством буфера (рН 6,4) и соединяют с раствором формалинизированных и танизированных эритроцитов в таком количестве, чтобы окончательное разведение Аг было 1:10. Установлено, что именно это разведение является оптимальным, так как не дает гемолиза или агглютинации эритроцитов в отсутствие специфической сыворотки. Содержимое колбочек встряхивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 1…