13 марта 2009

Определение содержания диодраста в крови и моче (по Кирееву)

Принцип метода заключается в определении количества йода, который входит в состав диодраста. Это количество условно приравнивают к количеству диодраста. Методика. К 0,5 мл сыворотки добавить 1 мл 10% раствора вольфрамата натрия. Содержимое пробирки смешать. Добавить по каплям 1 мл 2/3 H24, вновь смешать. Через 5 мин раствор центрифугируют в. течение 10 мин при 3000 об/мин. В стаканчик берут 1 мл центрифугата (0,2 мл сыворотки), добавляют 2 мл воды, 0,3 мл 0,4 М раствора перманганата калия и 0,2 мл 4 н. раствора серной кислоты. Полученную смесь нагревают кипящей бане в течение 15 мин.

К смеси добавляют 4 — 5 капель 1 М раствора нитрита натрия до обесцвечивания раствора и вновь ставят стаканчик в водяную баню на 1 мин, после чего добавляют 8 капель 5 М раствора мочевины и вновь нагревают в водяной бане в течение 5 мин до прекращения выделения пузырьков закиси азота. Раствор охлаждают. Добавляют к нему 1 — 2 капли 1% раствора крахмала. Получают синее окрашивание. Производят титрование 0,0005% раствором тиосульфата натрия до исчезновения окраски. Расчет: атомная масса йода 126,92. Следовательно, 1 мл 1 н. раствора тиосульфата натрия соответствует 21,15 мг йода, а 1 мл 0,0005% раствора — 21,15 * 0,0005 = 0,01057, или 0,0106 мг.

Содержание йода (нмоль/л) высчитывают по формуле: (а*0,0106*1000)/0,2,

где:

  • а — количество миллилитров 0,0005 % раствора тиосульфата натрия, пошедшее на титрование пробы;
  • 100 — коэффициент пересчета в миллиграмм-проценты (по СИ коэффициент пересчета для йода 78,8);
  • 0,2 — количество миллилитров взятой для исследования сыворотки.

Определение содержания диодраста в моче проводят так же, как и определение диодраста в сыворотке крови. Мочу предварительно разводят в 100 раз. Выделившийся йод оттитровывают не 0,0005%, а 0,005% раствором тиосульфата натрия, 1 мл которого соответствует 0,106 мг йода.

Расчет производят по формуле: (а*0,106,100,100)/в,

где:

  • а — количество миллилитров 0,005% раствора тиосульфата натрия, пошедшего на титрование мочи;
  • в — количество миллилитров разведенной мочи, взятой для исследования;
  • 100 — коэффициент пересчета в миллиграмм-проценты;
  • 100 — разведение.

Клиренс диодраста приравнивается к величине почечного плазмотока.

Имея показатели содержания диодраста в сыворотке крови и моче, высчитывают эффективный почечный кровоток (мл/мин) по формуле:

(U*V*100)/P*(100-Г),

где:

  • U — концентрация диодраста в моче;
  • Р — концентрация диодраста в плазме крови;
  • V — минутный диурез;
  • Г — показатель гематокрита.

В норме эффективный почечный кровоток по диодрасту, так же как по ПАГ, на 1,73 м2 составляет примерно 600 мл/мин, а у детей в зависимости от возраста: у доношенного ребенка — 120 — 300 мл/мин, у грудного — 300 — 650 мл/мин, в возрасте старше 1 года — 360 — 660 мл/мин.

Зная величину почечного плазмотока и объем клубочкового фильтрата, легко высчитать величину клубочковой фильтрации по следующей формуле:

фкр)*100=0,

где:

  • Уф — величина клубочкового фильтрата;
  • Пкр — почечный кровоток.

В норме фильтрационная фракция составляет 1/5 часть общего почечного плазмотока.

Характеристика функций почек

Функция Среднее значение
Клиренс инулина, мл/мин 121 ±18,5
Клиренс ПАГ, мл/мин 598 + 81
Фильтрационная фракция (СИН/СПАГ), % 21,2 ± 3,5
Максимальная секреция ПАГ, мг/мин 77±12
Максимальная реабсорбция глюкозы (Тмакс), мг/мин 401 ±28
Максимальная реабсорбция фосфатов (Тмакс), мкмоль/мин 190 ±53
Реабсорбция эндогенных фосфатов, % 90,4 ± 4,7
Реабсорбция эндогенной мочевой кислоты, % 91,6 ± 3,2
Реабсорбция эндогенного β-азота, % 97,7 ± 0,8
Клиренс эндогенных фосфатов (Ср), мл/мин 10,8 ± 4,7
Клиренс эндогенной мочевой кислоты (Сβ, мл/ми.. 52,2 ±14
Клиренс эндогенного β -аминоазота (Сβ -амино-N), мл/мин 2,6 ±0,95
Клиренс мочевины (См), мл/мин 52,2 ±14
Клиренс натрия (CNa), мл/мин 1,8 ± 0,8
Клиренс хлора (CCl), мл/мин 2,4 ±0,75
Клиренс кальция ССа), мл/мин 2,1 ± 1,3
Клиренс калия (СK), мл/мин 12,6 ± 5,8
Отношение клиренса мочевины и инулина 0,43 ±0,12
Титруемая кислотность (при нагрузке) РО4, мкмоль/мин 170 ±20

«Детская урология», Н.А. Лопаткин

Читайте далее:



Для количественного определения изоферментов ЛДГ существует ряд методов, основанных на различии в апоферменте изозимов. Применяют методы электрофореза, хроматографии, термической инактивности и др. В клинике наиболее широко используется метод зонального электрофореза на агаровом геле с окрашиванием тетрахолиевыми солями, адсорбция на ДЗАЕ-целлюлозе и термическое инактивирование. Наиболее точны и надежны методы, основанные на электрофоретическом разделении изоферментов [Юрков Ю….

После окончания электрофореза пластинки перекладывают в специальную камеру для окраски, заливают красящую смесь и инкубируют в термостате 2 ч при 37 °С. Затем сливают смесь и несколько раз тщательно промывают агаровые пластинки дистиллированной водой. Сушку пластинок производят следующим образом: вырезанные по форме пластинки полоски хроматографической бумаги осторожно накладывают на агар, не сдвигая его. На чистую…

Общая активность ЛДГ в моче больных пиелонефритом в среднем достигает 37,5 ± 3,5 единицы Вроб-левского, но какой-либо зависимости ее от формы и степени тяжести пиелонефрита не отмечено. Перспективными для изучения при воспалительных заболеваниях почек являются ферменты малатдегидрогеназа (МДГ) и альдолаза (АЛД). МДГ относится к ферментам цикла Кребса, который катализирует обратимую реакцию окисления яблочной кислоты в…

Исследуемые сыворотки разводят 1:10 с помощью кроличьей сыворотки (в разведении 1:250), подогревают в электрической водяной бане при 54 °С в течение 20 мин (для разрушения комплемента) и охлаждают. Затем к ним добавляют формалинизированные или свежие эритроциты барана из расчета 0,2 мл на 1 мл сыворотки, содержимое пробирки встряхивают и помещают на 30 мин в термостат…

Приготовленные Аг разводят определенным количеством буфера (рН 6,4) и соединяют с раствором формалинизированных и танизированных эритроцитов в таком количестве, чтобы окончательное разведение Аг было 1:10. Установлено, что именно это разведение является оптимальным, так как не дает гемолиза или агглютинации эритроцитов в отсутствие специфической сыворотки. Содержимое колбочек встряхивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 1…