13 марта 2009

Определение «активных лейкоцитов» и клеток Штернгеймера — Малъбина

В 1949 г. R. Sternheimer и В. Malbin впервые использовали специальный краситель для прямого окрашивания осадка мочи. Живой лейкоцит как коллоидная система с большим содержанием митохондрий, гранул-мицелл и находящейся между ними жидкостью по закону проницаемости способен пропускать красители и окрашиваться в тот или иной цвет. В зависимости от силы воздействия раздражителя способность протоплазмы клетки к гранулообразованию изменяется.

Чем больше воздействие сильных раздражителей, тем меньше становится способность к гранулообразованию и быстрее происходит диффузное окрашивание клетки.

При применении красителя Штернгеймера — Мальбина окраска лейкоцита меняется в зависимости от жизнеспособности клеток: при сохранении жизнеспособности они имеют оттенок от голубого до бесцветного, при гибели меняет цвет от слабо розового до пурпурного. Последнее обстоятельство дает возможность определять активность воспалительного процесса в почечной ткани.

Методика. Свежевыпущенную мочу центрифугируют в течение 3 — 5 мин при 2500 об/мин. Сливают надосадочную жидкость. К осадку в пробирку добавляют 1 — 2 капли красителя (3 части водноалкогольного генцианового фиолетового и 97 частей шафранина). Каплю окрашенного осадка наносят на предметное стекло и подвергают иммерсионному микроскопированию.

В зависимости от морфологических особенностей лейкоциты окрашиваются по-разному: одни в красный, другие в голубой цвет. Голубые лейкоциты могут иметь различную форму и размеры. Одни из них могут оставаться обычной формы и размеров, другие увеличиваются в 2 — 3 раза, приобретают округлую форму, в них хорошо различима голубая зернистость протоплазмы с вакуольными включениями в ней и темным многодольчатым ядром. Лейкоциты второго типа были названы клетками Штернгеймера — Мальбина.

Исследования А. Я. Пытеля, В. С. Рябинского, В. Е. Родоман (1968) показали, что клетки Штернгеймера — Мальбина представляют собой обычные «живые» активные лейкоциты, которые проникают в мочу из очага воспаления в почке. Для них характерны изменения величины клетки, в зависимости от изменений осмотических свойств мочи (увеличение размеров при низкой осмотической концентрации и уменьшение при высоком осмотическом давлении) и появление броуновского движения гранул в цитоплазме.

В. С. Рябинский и В. Е. Родоман несколько видоизменили методику Штернгеймера — Мальбина, заменив шафранин на доступный эозин.

Методика. К 0,5 мл центрифугированного осадка мочи добавляют 0,5 мл дистиллированной воды и 2 — 3 капли краски (250 мг эозина, 2 мл 1% раствора фенола, 0,5 мл 40% раствора формалина, 10 мл глицерина, 87,5 мл дистилированной воды). Содержимое пробирки смешивают в течение 5 мин и исследуют при применении иммерсии в микроскопе. На фоне окрашенных в розовый цвет «мертвых» лейкоцитов, эпителиальных клеток клетки Штернгеймера — Мальбина и «активные» лейкоциты либо не окрашиваются, либо имеют голубой цвет.

Обнаружение в моче более 10% клеток Штернгеймера — Мальбина и «активных» лейкоцитов считается характерным для пиелонефрита, особенно если эти клетки выявлены в моче, взятой непосредственно из почечных лоханок. Как показали многочисленные наблюдения урологов, клетки Штернгеймера — Мальбина и «активные» лейкоциты в моче появляются при воспалительных процессах в почечной паренхиме (пиелонефрит) и отсутствуют при цистите, что может служить дополнительным методом для дифференциальной диагностики между ними.

Однако позже отечественными исследователями было показано, что клетки Штернгеймера — Мальбина не являются строго специфичными для пиелонефрита. Они могут появиться и при других заболеваниях почек. Наличие их в моче в большом количестве наряду с другими дополнительными методами исследования помогает диагностировать пиелонефрит, особенно в активной фазе, отсутствие же их не исключает этого диагноза.

«Детская урология», Н.А. Лопаткин



Исследуемые сыворотки разводят 1:10 с помощью кроличьей сыворотки (в разведении 1:250), подогревают в электрической водяной бане при 54 °С в течение 20 мин (для разрушения комплемента) и охлаждают. Затем к ним добавляют формалинизированные или свежие эритроциты барана из расчета 0,2 мл на 1 мл сыворотки, содержимое пробирки встряхивают и помещают на 30 мин в термостат…

Приготовленные Аг разводят определенным количеством буфера (рН 6,4) и соединяют с раствором формалинизированных и танизированных эритроцитов в таком количестве, чтобы окончательное разведение Аг было 1:10. Установлено, что именно это разведение является оптимальным, так как не дает гемолиза или агглютинации эритроцитов в отсутствие специфической сыворотки. Содержимое колбочек встряхивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 1…

Свежевыпущенную мочу центрифугируют в течение 10 мин при 1500 об/мин, отсасывают надосадочную жидкость и осадок дважды промывают в изотоническом растворе хлорида натрия с фосфатным буфером (рН 7,3). В отмытый осадок добавляют 0,2 мл разведенной 1:5 люминесцирующей кроличьей сыворотки против глобулинов человека. Осадок мочи вместе с сывороткой инкубируют при 37 °С в течение 30 мин, после…

Для количественного определения изоферментов ЛДГ существует ряд методов, основанных на различии в апоферменте изозимов. Применяют методы электрофореза, хроматографии, термической инактивности и др. В клинике наиболее широко используется метод зонального электрофореза на агаровом геле с окрашиванием тетрахолиевыми солями, адсорбция на ДЗАЕ-целлюлозе и термическое инактивирование. Наиболее точны и надежны методы, основанные на электрофоретическом разделении изоферментов [Юрков Ю….

После окончания электрофореза пластинки перекладывают в специальную камеру для окраски, заливают красящую смесь и инкубируют в термостате 2 ч при 37 °С. Затем сливают смесь и несколько раз тщательно промывают агаровые пластинки дистиллированной водой. Сушку пластинок производят следующим образом: вырезанные по форме пластинки полоски хроматографической бумаги осторожно накладывают на агар, не сдвигая его. На чистую…