Описание метода Пиза
Измельченные кусочки подвергаются предварительной фиксации в 4% глютаральдегиде, забуференном 0,1 М какодилатным буфером (рН 7,3) в течение 2 ч при температуре 4 °С.
Хорошие результаты дает также применение 0,1 М фосфатного буфера (рН 7,3). Затем кусочки промывают в 0,2 М растворе сахарозы па какодилатном буфере в течение 12 ч и фиксируют в течение 2 ч в осмиевом фиксаторе по Колфилду, по с добавлением 0,02% CaCl2.
Фиксированные кусочки обезвоживают: ополаскивают 50% этиловым спиртом, переносят в 70% спирт на 15 — 20 мин (меняя его 2 раза), затем в 96% этанол на 30 мин, также меняя его 2 раза, и в абсолютный спирт на 1 ч, меняя его 3 раза.
Затем кусочки переносят в окись пропилена на 30 мин, меняя его 2 раза. Вместо окиси пропилена можно использовать ацетон.
После дегидратации кусочки пропитывают окисью пропилена (или ацетона) и рабочей смесью (1:1) в течение 1 ч, затем в этой же смеси (в соотношении 1:2) от 1 до 3 ч. Далее помещают в рабочую смесь па 12 ч. В состав рабочей смеси входит эпон 812 — 25 мл, аралдит — 15 мл, дюркупан — 2 мл, ДД8А — 55 мл, ДМР 30 — 3 мл.
В качестве заливочной среды можно использовать эпон 812, аралдит, по лучше смесь эпона 812 с аралдитом, которая обеспечивает оптимальные условия готовых блоков в процессе резки на ультратоме. Залитые кусочки в рабочей смеси помещают для полимеризации в термостат при 35 °С на ночь, затем при 49 °С — на день и при 58 °С опять на ночь.
После этого блоки готовы к заточке и резке на ультрамикротоме. Ультратонкие срезы контрастируют насыщенным раствором уранилацетата в 70% спирте в течение 15 мин при температуре 57 °С. Затем срезы контрастируют ацетатом свинца в течение 10 — 15 мин.
«Патоморфологическая диагностика заболеваний кожи»,
Г.М.Цветкова, В.К.Мордовцев
Биопсию кожи лучше производить циркулярным полном, который значительно упрощает взятие материала и не травмирует прилежащие участки. Для постановки патологоанатомического диагноза большое значение имеют правильная фиксация и последующая обработка биопсированного кусочка кожи. Лучшим фиксатором для обычных гистологических целей является 10% нейтральный формалин. Его количество должно превышать в 50 раз объем биоптата. Так, биоптат размером 1 X…
Гистохимические методы исследования в основном применяются для научных целей, однако некоторые из них имеют диагностическое значение, как, на пример, ШИК-реакция, окраска альциановым голубым или толуидиновым синим, азаном по методу Гейденгайна и др. С помощью ШИК-реакции выявляют полисахариды: гликоген и муконолисахариды (МПС), особенно нейтральные. Эта реакция необходима для определения ШИК-положительных фибриноида и фибрина. Грибы и хитиновые…
Метод Шифф — йодная кислота применяется для выявления гликогена и нейтральных МПС. Наиболее распространена модификация Хочкисса и МакМануса. Фиксация и способы приготовления срезов различны. Срезы из дистиллированной воды переносят на 15 мин в раствор нерйодата натрия или калия (350 мг перйодата калия или натрия + 50 мл дистиллированной воды + 0,5 мл 35% азотной кислоты),…
Срезы, полученные из материала, фиксированного разными способами, помещают в 12% нейтральный формалин на 1 сут, после чего ополаскивают их дистиллированной водой и оставляют в ней на 10 — 15 мин. Затем срезы переносят в раствор перманганата калия (100 мг перманганата калия + 40 мг дистиллированной воды) на 10 мни, хорошо отмывают в нескольких порциях дистиллированной…
В 40 мл дистиллированной воды растворяют 80 мг нитрата серебра. К 10 мл раствора прибавляют 8 капель 40% гидроокиси натрия до получения осадка. Затем по каплям продолжают добавлять аммиак до растворения осадка, после чего до 40 доливают дистиллированную воду. Раствор должен быть бесцветным. Окраска азокармином по методу Гейденгайна выявляет белки соединительной ткани и плазмы крови….
