Описание метода Пиза
Измельченные кусочки подвергаются предварительной фиксации в 4% глютаральдегиде, забуференном 0,1 М какодилатным буфером (рН 7,3) в течение 2 ч при температуре 4 °С.
Хорошие результаты дает также применение 0,1 М фосфатного буфера (рН 7,3). Затем кусочки промывают в 0,2 М растворе сахарозы па какодилатном буфере в течение 12 ч и фиксируют в течение 2 ч в осмиевом фиксаторе по Колфилду, по с добавлением 0,02% CaCl2.
Фиксированные кусочки обезвоживают: ополаскивают 50% этиловым спиртом, переносят в 70% спирт на 15 — 20 мин (меняя его 2 раза), затем в 96% этанол на 30 мин, также меняя его 2 раза, и в абсолютный спирт на 1 ч, меняя его 3 раза.
Затем кусочки переносят в окись пропилена на 30 мин, меняя его 2 раза. Вместо окиси пропилена можно использовать ацетон.
После дегидратации кусочки пропитывают окисью пропилена (или ацетона) и рабочей смесью (1:1) в течение 1 ч, затем в этой же смеси (в соотношении 1:2) от 1 до 3 ч. Далее помещают в рабочую смесь па 12 ч. В состав рабочей смеси входит эпон 812 — 25 мл, аралдит — 15 мл, дюркупан — 2 мл, ДД8А — 55 мл, ДМР 30 — 3 мл.
В качестве заливочной среды можно использовать эпон 812, аралдит, по лучше смесь эпона 812 с аралдитом, которая обеспечивает оптимальные условия готовых блоков в процессе резки на ультратоме. Залитые кусочки в рабочей смеси помещают для полимеризации в термостат при 35 °С на ночь, затем при 49 °С — на день и при 58 °С опять на ночь.
После этого блоки готовы к заточке и резке на ультрамикротоме. Ультратонкие срезы контрастируют насыщенным раствором уранилацетата в 70% спирте в течение 15 мин при температуре 57 °С. Затем срезы контрастируют ацетатом свинца в течение 10 — 15 мин.
«Патоморфологическая диагностика заболеваний кожи»,
Г.М.Цветкова, В.К.Мордовцев
Фиксация особенного значения не имеет, срезы можно приготовить на замораживающем микротоме, а также после заливки в парафин. Перед окрашиванием их помещают в изотонический раствор хлорида натрия на 3 ч при температуре 37 °С, затем переносят в 0,5% раствор толуидинового синего на 18 ч. После этого срезы быстро промывают в трижды сменяемой дистиллированной воде, высушивают фильтровальной…
Биопсию кожи лучше производить циркулярным полном, который значительно упрощает взятие материала и не травмирует прилежащие участки. Для постановки патологоанатомического диагноза большое значение имеют правильная фиксация и последующая обработка биопсированного кусочка кожи. Лучшим фиксатором для обычных гистологических целей является 10% нейтральный формалин. Его количество должно превышать в 50 раз объем биоптата. Так, биоптат размером 1 X…
Гистохимические методы исследования в основном применяются для научных целей, однако некоторые из них имеют диагностическое значение, как, на пример, ШИК-реакция, окраска альциановым голубым или толуидиновым синим, азаном по методу Гейденгайна и др. С помощью ШИК-реакции выявляют полисахариды: гликоген и муконолисахариды (МПС), особенно нейтральные. Эта реакция необходима для определения ШИК-положительных фибриноида и фибрина. Грибы и хитиновые…
Метод Шифф — йодная кислота применяется для выявления гликогена и нейтральных МПС. Наиболее распространена модификация Хочкисса и МакМануса. Фиксация и способы приготовления срезов различны. Срезы из дистиллированной воды переносят на 15 мин в раствор нерйодата натрия или калия (350 мг перйодата калия или натрия + 50 мл дистиллированной воды + 0,5 мл 35% азотной кислоты),…
Срезы, полученные из материала, фиксированного разными способами, помещают в 12% нейтральный формалин на 1 сут, после чего ополаскивают их дистиллированной водой и оставляют в ней на 10 — 15 мин. Затем срезы переносят в раствор перманганата калия (100 мг перманганата калия + 40 мг дистиллированной воды) на 10 мни, хорошо отмывают в нескольких порциях дистиллированной…
