14 декабря 2010

Гистохимические методы исследования

Гистохимические методы исследования в основном применяются для научных целей, однако некоторые из них имеют диагностическое значение, как, на пример, ШИК-реакция, окраска альциановым голубым или толуидиновым синим, азаном по методу Гейденгайна и др.

С помощью ШИК-реакции выявляют полисахариды: гликоген и муконолисахариды (МПС), особенно нейтральные. Эта реакция необходима для определения ШИК-положительных фибриноида и фибрина. Грибы и хитиновые оболочки паразитов также дают ШИК-положительную реакцию.

Для отличия нейтральных МПС и грибов от отложения гликогена делают две серии срезов, один из которых обрабатывают диастазой. Дифференциация основана на том, что гликоген диастозолабилен, а нейтральные МПС и трибы диастазорезистентны.

Наличие гликогена часто является диагностическим признаком таких заболеваний, как опухоли фолликулов волос (светло-клеточная гидроаденома и эккринная порома), все клетки эпителиальных влагалищ и потовых желез при этом содержат его в большом количестве. Нейтральные МПС обнаруживают при болезни Педжета, светлоклеточной гидроаденоме, эккринной снираденоме и эккринной пороме.

При окраске альциановым голубым или толуидиновым синим выявляют гликозамногликаны, которые присутствуют в небольшом количестве в основной субстанции кожи и в норме. Эта окраска позволяет определить тиалуроновую кислоту и муцин.

Муцин содержится в железистых образованиях при болезни Педжета, в фолликулах при фолликулярном муцинозе, вокруг фолликулов при муцинозном облысении, метастазах аденокарциномы из органов пищеварительного тракта.

Гликозаминогликаны, кроме того, обнаруживают в тканевых базофилах (тучных клетках), а гликозаминогликаны типа гиалуроновой кислоты — в дерме при коллагенозах (красная волчанка, склеродермия и др.). Для идентификации гликозаминогликанов необходимо производить обработку контрольных срезов тиалуронидазой.

Для этого их опускают в тестикулярную гиалуронидазу (50 мг), приготовленную на изотоническом растворе хлорида натрия (50 мг), и помещают на 3 ч в термостат при температуре 37 °С, затем окрашивают толуидиновым синим. Метахромазия, обусловленная гиалуроновой кислотой, исчезает после обработки гиалуронидазой, хондроитинсульфаты при этом не разрушаются.

Приводим описание нескольких гистохимических методов диагностики некоторых кожных заболеваний в нашей модификации.

«Патоморфологическая диагностика заболеваний кожи»,
Г.М.Цветкова, В.К.Мордовцев

Читайте далее:



В 40 мл дистиллированной воды растворяют 80 мг нитрата серебра. К 10 мл раствора прибавляют 8 капель 40% гидроокиси натрия до получения осадка. Затем по каплям продолжают добавлять аммиак до растворения осадка, после чего до 40 доливают дистиллированную воду. Раствор должен быть бесцветным. Окраска азокармином по методу Гейденгайна выявляет белки соединительной ткани и плазмы крови….

0,25% водный раствор азокармина кипятят несколько раз, охлаждают и к 100 мл красителя прибавляют 1 мл ледяной уксусной кислоты. Анилиновый спирт получают путем добавления к 50 мл 96% спирта 3 капель анилинового масла. Большое диагностическое значение имеют также исследования с помощью поляризационного микроскопа для выявления двоякопреломляющих липидов инородных тел и амилоида. Двоякопреломляющие липиды характерны для…

С целью более элективной окраски рекомендуется фиксировать биопсированный кусочек в ацетоне с последующей заливкой в парафин. Биоптат помещают в холодный ацетон на 2 ч (в холодильнике), затем выдерживают в двух порциях 96% этанола (в каждой — сутки), в двух порциях абсолютного спирта (в каждой по 12 ч). Затем помещают в касторовое или анилиновое масло до…

Фиксация различная. Парафиновые срезы на сутки помещают в 3% раствор перекиси водорода, затем на 15 — 20 мин в карболовый гематоксилин (гематоксилин 1,75 г + 200 мл дистиллированной воды + 5 г кристаллической карболовой кислоты + 10 мл 10% фосфорно-вольфрамовой кислоты), ополаскивают дистиллированной водой, дифференцируют в 10% растворе фосфорно-вольфрамовой кислоты (до 1 сут), несколько часов…

Измельченные кусочки подвергаются предварительной фиксации в 4% глютаральдегиде, забуференном 0,1 М какодилатным буфером (рН 7,3) в течение 2 ч при температуре 4 °С. Хорошие результаты дает также применение 0,1 М фосфатного буфера (рН 7,3). Затем кусочки промывают в 0,2 М растворе сахарозы па какодилатном буфере в течение 12 ч и фиксируют в течение 2 ч…