14 декабря 2010

Окраска по методу Браше

С целью более элективной окраски рекомендуется фиксировать биопсированный кусочек в ацетоне с последующей заливкой в парафин. Биоптат помещают в холодный ацетон на 2 ч (в холодильнике), затем выдерживают в двух порциях 96% этанола (в каждой — сутки), в двух порциях абсолютного спирта (в каждой по 12 ч).

Затем помещают в касторовое или анилиновое масло до просветления ткани, далее в ксилол (по 30 мин в двух порциях). Из ксилола переносят в смесь парафина и ксилола (1:1) и затем, как обычно, заливают в парафин.

Парафиновые срезы из дистиллированной воды помещают в раствор метилового зеленого
— пиронина на 20 — 30 мин, затем споласкивают водой и высушивают фильтровальной бумагой, ополаскивают в ацетоне, смеси ацетона и ксилола в равных соотношениях, смеси 3 частей ксилола и 1 части ацетона, далее просветляют в ксилоле и заключают в канадский бальзам.

Приготовление метилового зеленого — пиронина. В делительную воронку помещают 50 мг метилового зеленого, 10 мл дистиллированной воды и 30 мл хлороформа.

Смесь несколько раз встряхивают и сливают осторожно хлороформ, затем его снова наливают, встряхивают, процедуру повторяют 3 раза, пока хлороформ не станет светлым. Последний раз, сливая хлороформ, сливают и немного красителя.

Затем берут 90 мг пиронина, прибавляют 9 мл дистиллированной воды. К 9 мл этого раствора прибавляют 4 мл приготовленного раствора метилового зеленого, затем доливают до 25 мл дистиллированной воды и прибавляют 25 мл ацетатного буфера (рН 4,8). Готовый раствор может находиться в холодильнике длительное время.

Дл выявления в тканях фибрина, что очень важно для диагностики аллергических заболеваний кожи, применяют метод Шуенинова.

«Патоморфологическая диагностика заболеваний кожи»,
Г.М.Цветкова, В.К.Мордовцев

Читайте далее:



0,25% водный раствор азокармина кипятят несколько раз, охлаждают и к 100 мл красителя прибавляют 1 мл ледяной уксусной кислоты. Анилиновый спирт получают путем добавления к 50 мл 96% спирта 3 капель анилинового масла. Большое диагностическое значение имеют также исследования с помощью поляризационного микроскопа для выявления двоякопреломляющих липидов инородных тел и амилоида. Двоякопреломляющие липиды характерны для…

Фиксация различная. Парафиновые срезы на сутки помещают в 3% раствор перекиси водорода, затем на 15 — 20 мин в карболовый гематоксилин (гематоксилин 1,75 г + 200 мл дистиллированной воды + 5 г кристаллической карболовой кислоты + 10 мл 10% фосфорно-вольфрамовой кислоты), ополаскивают дистиллированной водой, дифференцируют в 10% растворе фосфорно-вольфрамовой кислоты (до 1 сут), несколько часов…

Измельченные кусочки подвергаются предварительной фиксации в 4% глютаральдегиде, забуференном 0,1 М какодилатным буфером (рН 7,3) в течение 2 ч при температуре 4 °С. Хорошие результаты дает также применение 0,1 М фосфатного буфера (рН 7,3). Затем кусочки промывают в 0,2 М растворе сахарозы па какодилатном буфере в течение 12 ч и фиксируют в течение 2 ч…

Фиксация особенного значения не имеет, срезы можно приготовить на замораживающем микротоме, а также после заливки в парафин. Перед окрашиванием их помещают в изотонический раствор хлорида натрия на 3 ч при температуре 37 °С, затем переносят в 0,5% раствор толуидинового синего на 18 ч. После этого срезы быстро промывают в трижды сменяемой дистиллированной воде, высушивают фильтровальной…

Биопсию кожи лучше производить циркулярным полном, который значительно упрощает взятие материала и не травмирует прилежащие участки. Для постановки патологоанатомического диагноза большое значение имеют правильная фиксация и последующая обработка биопсированного кусочка кожи. Лучшим фиксатором для обычных гистологических целей является 10% нейтральный формалин. Его количество должно превышать в 50 раз объем биоптата. Так, биоптат размером 1 X…