Метод Шифф — йодная кислота
Метод Шифф — йодная кислота применяется для выявления гликогена и нейтральных МПС. Наиболее распространена модификация Хочкисса и МакМануса.
Фиксация и способы приготовления срезов различны. Срезы из дистиллированной воды переносят на 15 мин в раствор нерйодата натрия или калия (350 мг перйодата калия или натрия + 50 мл дистиллированной воды + 0,5 мл 35% азотной кислоты), затем быстро ополаскивают в двух порциях дистиллированной воды и помещают на 5 мин в раствор сернистой воды (1,5 г метабисульфита натрия + 300 мл дистиллированной воды + 15 мл 1 и раствора соляной кислоты). После этого переносят в реактив Шиффа на 30 — 60 мин и снова в сернистую воду (три порции по 5 мин в каждой).
Затем выдерживают в дистиллированной воде до покраснения срезов, докрашивают ядра гематоксилином Эрлиха, разведенным до цвета мадеры, в течение 5 мин н промывают в водопроводной воде до посинения срезов.
Ополаскивают дистиллированной водой, проводят через спирты восходящей концентрации (70, 96, 100%), просветляют в ксилоле в течение 10 — 12 ч, заключают в канадский бальзам. Для идентификации гликогена и нейтральных МПС контрольные срезы перед окраской обрабатывают амилазой слюны или диастазой, затем красят, как указано выше.
Приготовление раствора Шиффа
1 г основного фуксина, растертого в ступке, помещают в 200 мл кипящей дистиллированной воды, встряхивают в течение 5 мин, охлаждают до 50 °С, фильтруют, добавляют вначале 20 мл 1 н. раствора хлористоводородной (соляной) кислоты, охлаждают до 25 °С, затем 1 г метабисульфата натрия или калия.
Оставляют в темноте на 14 — 24 ч, затем добавляют 2 г активированного угля, встряхивают в течение 1 мин, снова фильтруют и ставят в холодильник. Раствор должен быть бесцветным. Сернистую воду и перйодат калия или натрия рекомендуется готовить непосредственно перед употреблением.
«Патоморфологическая диагностика заболеваний кожи»,
Г.М.Цветкова, В.К.Мордовцев
0,25% водный раствор азокармина кипятят несколько раз, охлаждают и к 100 мл красителя прибавляют 1 мл ледяной уксусной кислоты. Анилиновый спирт получают путем добавления к 50 мл 96% спирта 3 капель анилинового масла. Большое диагностическое значение имеют также исследования с помощью поляризационного микроскопа для выявления двоякопреломляющих липидов инородных тел и амилоида. Двоякопреломляющие липиды характерны для…
С целью более элективной окраски рекомендуется фиксировать биопсированный кусочек в ацетоне с последующей заливкой в парафин. Биоптат помещают в холодный ацетон на 2 ч (в холодильнике), затем выдерживают в двух порциях 96% этанола (в каждой — сутки), в двух порциях абсолютного спирта (в каждой по 12 ч). Затем помещают в касторовое или анилиновое масло до…
Фиксация различная. Парафиновые срезы на сутки помещают в 3% раствор перекиси водорода, затем на 15 — 20 мин в карболовый гематоксилин (гематоксилин 1,75 г + 200 мл дистиллированной воды + 5 г кристаллической карболовой кислоты + 10 мл 10% фосфорно-вольфрамовой кислоты), ополаскивают дистиллированной водой, дифференцируют в 10% растворе фосфорно-вольфрамовой кислоты (до 1 сут), несколько часов…
Измельченные кусочки подвергаются предварительной фиксации в 4% глютаральдегиде, забуференном 0,1 М какодилатным буфером (рН 7,3) в течение 2 ч при температуре 4 °С. Хорошие результаты дает также применение 0,1 М фосфатного буфера (рН 7,3). Затем кусочки промывают в 0,2 М растворе сахарозы па какодилатном буфере в течение 12 ч и фиксируют в течение 2 ч…
Фиксация особенного значения не имеет, срезы можно приготовить на замораживающем микротоме, а также после заливки в парафин. Перед окрашиванием их помещают в изотонический раствор хлорида натрия на 3 ч при температуре 37 °С, затем переносят в 0,5% раствор толуидинового синего на 18 ч. После этого срезы быстро промывают в трижды сменяемой дистиллированной воде, высушивают фильтровальной…
