14 декабря 2010

Метод Шифф — йодная кислота

Метод Шифф — йодная кислота применяется для выявления гликогена и нейтральных МПС. Наиболее распространена модификация Хочкисса и МакМануса.

Фиксация и способы приготовления срезов различны. Срезы из дистиллированной воды переносят на 15 мин в раствор нерйодата натрия или калия (350 мг перйодата калия или натрия + 50 мл дистиллированной воды + 0,5 мл 35% азотной кислоты), затем быстро ополаскивают в двух порциях дистиллированной воды и помещают на 5 мин в раствор сернистой воды (1,5 г метабисульфита натрия + 300 мл дистиллированной воды + 15 мл 1 и раствора соляной кислоты). После этого переносят в реактив Шиффа на 30 — 60 мин и снова в сернистую воду (три порции по 5 мин в каждой).

Затем выдерживают в дистиллированной воде до покраснения срезов, докрашивают ядра гематоксилином Эрлиха, разведенным до цвета мадеры, в течение 5 мин н промывают в водопроводной воде до посинения срезов.

Ополаскивают дистиллированной водой, проводят через спирты восходящей концентрации (70, 96, 100%), просветляют в ксилоле в течение 10 — 12 ч, заключают в канадский бальзам. Для идентификации гликогена и нейтральных МПС контрольные срезы перед окраской обрабатывают амилазой слюны или диастазой, затем красят, как указано выше.

Приготовление раствора Шиффа

1 г основного фуксина, растертого в ступке, помещают в 200 мл кипящей дистиллированной воды, встряхивают в течение 5 мин, охлаждают до 50 °С, фильтруют, добавляют вначале 20 мл 1 н. раствора хлористоводородной (соляной) кислоты, охлаждают до 25 °С, затем 1 г метабисульфата натрия или калия.

Оставляют в темноте на 14 — 24 ч, затем добавляют 2 г активированного угля, встряхивают в течение 1 мин, снова фильтруют и ставят в холодильник. Раствор должен быть бесцветным. Сернистую воду и перйодат калия или натрия рекомендуется готовить непосредственно перед употреблением.

«Патоморфологическая диагностика заболеваний кожи»,
Г.М.Цветкова, В.К.Мордовцев

Читайте далее:



Фиксация различная. Парафиновые срезы на сутки помещают в 3% раствор перекиси водорода, затем на 15 — 20 мин в карболовый гематоксилин (гематоксилин 1,75 г + 200 мл дистиллированной воды + 5 г кристаллической карболовой кислоты + 10 мл 10% фосфорно-вольфрамовой кислоты), ополаскивают дистиллированной водой, дифференцируют в 10% растворе фосфорно-вольфрамовой кислоты (до 1 сут), несколько часов…

Измельченные кусочки подвергаются предварительной фиксации в 4% глютаральдегиде, забуференном 0,1 М какодилатным буфером (рН 7,3) в течение 2 ч при температуре 4 °С. Хорошие результаты дает также применение 0,1 М фосфатного буфера (рН 7,3). Затем кусочки промывают в 0,2 М растворе сахарозы па какодилатном буфере в течение 12 ч и фиксируют в течение 2 ч…

Фиксация особенного значения не имеет, срезы можно приготовить на замораживающем микротоме, а также после заливки в парафин. Перед окрашиванием их помещают в изотонический раствор хлорида натрия на 3 ч при температуре 37 °С, затем переносят в 0,5% раствор толуидинового синего на 18 ч. После этого срезы быстро промывают в трижды сменяемой дистиллированной воде, высушивают фильтровальной…

Биопсию кожи лучше производить циркулярным полном, который значительно упрощает взятие материала и не травмирует прилежащие участки. Для постановки патологоанатомического диагноза большое значение имеют правильная фиксация и последующая обработка биопсированного кусочка кожи. Лучшим фиксатором для обычных гистологических целей является 10% нейтральный формалин. Его количество должно превышать в 50 раз объем биоптата. Так, биоптат размером 1 X…

Гистохимические методы исследования в основном применяются для научных целей, однако некоторые из них имеют диагностическое значение, как, на пример, ШИК-реакция, окраска альциановым голубым или толуидиновым синим, азаном по методу Гейденгайна и др. С помощью ШИК-реакции выявляют полисахариды: гликоген и муконолисахариды (МПС), особенно нейтральные. Эта реакция необходима для определения ШИК-положительных фибриноида и фибрина. Грибы и хитиновые…