14 декабря 2010

Биопсия кожи

Биопсию кожи лучше производить циркулярным полном, который значительно упрощает взятие материала и не травмирует прилежащие участки.

Для постановки патологоанатомического диагноза большое значение имеют правильная фиксация и последующая обработка биопсированного кусочка кожи. Лучшим фиксатором для обычных гистологических целей является 10% нейтральный формалин. Его количество должно превышать в 50 раз объем биоптата. Так, биоптат размером 1 X 1 см помещают в 50 мл формалина.

Минимальное время фиксации — 1 сут, удлинение срока фиксации улучшает качество препарата. Недопустимо оставлять биопсированный материал длительное время без фиксатора или помещать его в изотонический раствор хлорида натрия, как это иногда практикуется. В таких случаях биоптат высыхает, сморщивается или подвергается аутолизу, становясь непригодным для диагностических целей.

Уплотнять кусочек лучше в парафине, что позволяет более детально изучить клеточные элементы. При необходимости получения быстрого ответа или для специальной окраски (на жиры, обнаружение нервных волокон) используют срезы, полученные на замораживающем микротоме.

Срезы должны быть тонкими (5 — 10 мкм), просматривать нужно несколько срезов, лучше серию их для определения более характерных черт того или иного заболевания.

Обязательно долины быть применены три основные окраски срезов: гематоксилин и эозин для получения данных об общей морфологической картине биопсированной кожи, пикрофуксин но методу Ван-Гизона для изучения соединительной ткани, резорцин-фуксин по методу Вейгерта для определения состояния эластических волокон. Указанные методы окраски изложены в руководствах С. С. Вайля (1947), Г. А. Меркулова (1956), В. Г. Елисеева (1967).

Парафиновые срезы кожи мы рекомендуем окрашивать гематоксилином Эрлиха не менее 30 мин с докраской эозином. В отличие от окраски пикрофуксином по методу Ван-Гизона мы предлагаем удлинить экспозицию в гематоксилине Эрлиха и пикрофуксине соответственно до 10 и 30 мин.

Кроме того, в некоторых случаях требуется дополнительно производить окраску по методу Грама — Вейгерта для обнаружения патогенных грибов, импрегнацию серебром по методу Фута для выявления аргирофильных или ретикулиновых волокон, что особенно важно при диагностировании лимфом, окраску Суданом оранжевым на жир, реакцию Перльса на железо.

«Патоморфологическая диагностика заболеваний кожи»,
Г.М.Цветкова, В.К.Мордовцев

Читайте далее:



В 40 мл дистиллированной воды растворяют 80 мг нитрата серебра. К 10 мл раствора прибавляют 8 капель 40% гидроокиси натрия до получения осадка. Затем по каплям продолжают добавлять аммиак до растворения осадка, после чего до 40 доливают дистиллированную воду. Раствор должен быть бесцветным. Окраска азокармином по методу Гейденгайна выявляет белки соединительной ткани и плазмы крови….

0,25% водный раствор азокармина кипятят несколько раз, охлаждают и к 100 мл красителя прибавляют 1 мл ледяной уксусной кислоты. Анилиновый спирт получают путем добавления к 50 мл 96% спирта 3 капель анилинового масла. Большое диагностическое значение имеют также исследования с помощью поляризационного микроскопа для выявления двоякопреломляющих липидов инородных тел и амилоида. Двоякопреломляющие липиды характерны для…

С целью более элективной окраски рекомендуется фиксировать биопсированный кусочек в ацетоне с последующей заливкой в парафин. Биоптат помещают в холодный ацетон на 2 ч (в холодильнике), затем выдерживают в двух порциях 96% этанола (в каждой — сутки), в двух порциях абсолютного спирта (в каждой по 12 ч). Затем помещают в касторовое или анилиновое масло до…

Фиксация различная. Парафиновые срезы на сутки помещают в 3% раствор перекиси водорода, затем на 15 — 20 мин в карболовый гематоксилин (гематоксилин 1,75 г + 200 мл дистиллированной воды + 5 г кристаллической карболовой кислоты + 10 мл 10% фосфорно-вольфрамовой кислоты), ополаскивают дистиллированной водой, дифференцируют в 10% растворе фосфорно-вольфрамовой кислоты (до 1 сут), несколько часов…

Измельченные кусочки подвергаются предварительной фиксации в 4% глютаральдегиде, забуференном 0,1 М какодилатным буфером (рН 7,3) в течение 2 ч при температуре 4 °С. Хорошие результаты дает также применение 0,1 М фосфатного буфера (рН 7,3). Затем кусочки промывают в 0,2 М растворе сахарозы па какодилатном буфере в течение 12 ч и фиксируют в течение 2 ч…