Комплекс обратная транскриптаза — РНКаза Н из вируса лейкоза Френд (Fr — MuLV)

Комплекс обратная транскриптаза — РНКаза Н из вируса лейкоза Френд (Fr — MuLV) состоит из полипептида с молекулярной массой 84 000. После мягкой протеазной обработки ферментативного комплекса Fr — MuLV образуется несколько дополнительных полипептидов с молекулярными массами 78 000, 68 000 и 60 000. Свойства комплекса после ограниченного протеолиза напоминают свойства α-субъединицы ревертазы AMV, которая образуется при такой же обработке β-субъединицы ревертазы AMV.

Оба фермента не транскрибируют вирусной РНК с эндогенной затравкой, не катализируют, по-видимому, синтеза двуспиральной ДНК, так как синтез становится нечувствителен к актиномицину D, а РНКаза Н в таком комплексе ведет себя как непроцессивная экзонуклеаза (Moelling, 1976).

Из одной субъединицы состоят также молекулы ревертазы из вирусов лейкоза Раушера (ферменты с молекулярными массами 70 000, 90 000 и 26 000), лейкоза кошек (70 000), сарком шерстистых обезьян (70 000), вируса Мезона — Пфайзера (120 000) и MTV (98 000).

С помощью электрофореза в полиакриламидном геле показано, что молекула ревертазы из MTV состоит из двух основных полипептидов с массой 85 000 и 50 000 и двух минорных с массой 18 000 и 14 000. Молекулярная масса активной формы обратной транскриптазы из MTV, определенная методом седиментации в глицерине, равна 108 000, а коэффициент седиментации — 5,6S (Marcus et al., 1976).

В очищенном препарате ревертазы R — MuLV не обнаружена активность ДНКазы, но присутствовала активность РНКазы Н (Modak, Marcus, 1977). Таким образом, выявлены существенные различия в структуре ДНК-полимераз из вирусов птиц и млекопитающих.

Методом пептидных карт установлено, что почти все пептиды α-субъединицы ревертазы AMV присутствуют и на пептидных картах β-субъединицы. Аналогичная ситуация наблюдалась и в отношении обратной транскриптазы RSV.

Кроме того, пептидные карты α- и β-субъединиц ревертазы AMV оказались очень близки к пептидным картам аналогичных субъединиц обратной транскриптазы RSV. Электрофорез в полиакриламидном геле солюбилизированных белков цельного AMV показал, что в состав вирионов входят обе субъединицы ревертазы и белки фермента составляют около 2% от общего количества белка вирусных частиц.

Предполагают, что α-субъединица молекулы ревертазы образуется из β-субъединицы путем специфического протеолитического расщепления.

Затем было установлено, что обратные транскиптазы из С-типов вирусов птиц, млекопитающих и приматов обладали весьма характерными серологическими специфичностями. Антисыворотка к ревертазе птичьих онкорнавирусов специфически ингибировала обратнотранскриптазную активность вирусов С-типа птиц и не влияла на активность фермента из онкорнавирусов мышей, крыс, хомячков, кошек, вируса Висна и «пенящего» вируса (FV).

Показано, что ревертаза RSV не имеет общих антигенных детерминант ни с одним из вирусных белков, сходна с обратной транскриптазой AMV и ферменты обоих вирусов несут типоспецифические детерминанты (Panet, 1977). Обратные транскриптазы онкорнавирусов млекопитающих иммунологически родственны, но не идентичны.

Ревертаза из вирионов В-типа мышей не инактивировалась антисывороткой к обратной транскриптазе вирусов С-типа.

Антитела против ревертазы из вируса кошек подавляли полимеразную активность вирусов саркомнолейкозного комплекса мышей, кошек и вируса лейкоза хомячков и не блокировали обратнотранскриптазную реакцию онкорнавирусов птиц, MTV и вируса С-типа обезьян. Следовательно, ревертазы онкорнавирусов обладают видовой и межвидовой антигенностью.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко