15 мая 2012

Реакции нейтрализации

В реакции нейтрализации были сопоставлены обратные транскриптазы вируса С-типа, выделенного из фибросаркомы шерстистых обезьян (SSV), вируса С-типа, изолированного из лимфосаркомы гиббона (GLV), вируса С-типа RD114H вирусов С-типа лисиц и птиц, а также вируса рака молочных желез обезьян (М — PMV). Перекрестная нейтрализация была получена только между обратными транскриптазами SSV и GLV, хотя обезьяны, от которых выделены вирусы, происходят из разных частей света.

Антисыворотки к обратной транскриптазе М — PMV не реагировали с другими белками М — PMV и не влияли на ферментативную активность вирусов миелобластоза птиц, лейкоза, вирусов Раушера и Френд мышей, рака молочных желез мышей, лейкозов кошек, SSV и GLV.

Во всех остальных случаях нейтрализация имела место только в гомологичной системе (Harewood, Ahmed, 1977). В конкурентных тестах показано, что вирусы лейкоза мышей (Гросса, Молони, BALB2) лишь частично подавляют иммунопреципитацию 125I-ревертазы R-WuLV гомологичной антисывороткой, причем уровень блокирования не превышал 50% (Krakower et al., 1977). В том случае, когда антисыворотку к ДНК-полимеразе R — MuLV использовали не против очищенного фермента, а против цельных вирионов, выявить отличий в ревертазах онкорнавирусов мышей не удавалось.

Антисыворотка к обратной транскриптазе вирусов С-типа приматов, RD114 и FeLV, способна к конкуренции. Это свидетельствует о том, что ревертаза R — MuLV содержит три типа антигенных детерминант: типовые, видовые и межвидовые.

Идентифицирована обратная транскриптаза из частиц, обнаруженных в злокачественных опухолях молочных желез человека (Ohno, Spiegelman, 1977). Этот фермент иммунологически перекрестно реагировал с ДНК-полимеразой М — PMV.

Подобного типа реагирование не выявлено с другими ревертазами онкорнавирусов птиц, мышей, кошек, обезьян, а также с ДНК-полимеразами, выделенными из клеток человека с мезенхимальными неоплазиями и из нормальных клеток (ДНК-полимера за α, β, γ).

Таким образом, антисыворотку к очищенному ферменту можно использовать для идентификации видовой принадлежности вирусов. Антисыворотка к полимеразе оказалась способной инактивировать фермент, но не матрицы в присутствии любой из трех экзогенных матриц: РНК, ДНК и ДНК — РНК-гибрида.

Это свидетельствует о том, что обе ДНК-полимеразные активности (РНК- и ДНК-зависимые) связаны с одним белком.

Переосаждением NH42, хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе и гельфильтрацией на сефадексе G-200 показано, что антиполимеразная активность связана с фракцией сывороточных IgG (Harewood, Ahmed, 1977).

Антитела к обратной транскриптазе SSV и GLV нейтрализовали активность фермента, выделенного из вирусоподобных частиц, полученных из крови больных лейкозом.

Эти данные указывают на вероятность существования общего комплекса саркомно-лейкозных вирусов для всего отряда приматов.

Антисыворотка к обратной транскриптазе SSV и GLV не влияла на активность ревертазы эндогенного вируса С-типа обезьян М7, в то время как антитела против фермента эндогенного вируса кошек RD114 ингибировали полимеразную активность вируса М7.

Таким образом, можно предположить о вероятном биологическом родстве между эндогенными вирусами млекопитающих, которые могут играть определенную роль в переносе генетической информации.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Родственные отношения между различными онкорнавирусами во многих работах исследовались методом молекулярной гибридизации. Чаще всего для этой цели использовали гибридизацию между меченой вирионной РНК и избытком синтезированного в присутствии актиномицина D in vitro 3Н-ДНК-продукта. Уровень образования ДНК — РНК-гибридов контролировали с помощью нуклеазы Sb специфичной в отношении однонитевой ДНК. Оказалось, что все исследованные эндогенные вирусы различных…

Весьма существенно, что при инфекции экзогенными онкорнавирусами во многих системах, например, клеток кошек вирусом FeLV или клеток крыс вирусами приматов, происходит активация эндогенных вирусов. Подобное тестирование синтеза РНК эндогенных вирусов в инфицированных клетках методом молекулярной гибридизации можно использовать для исследования вновь выделенных вирусов. Кроме того, 3Н-ДНК-продукты могут найти широкое применение для обнаружения включения генетического материала…

Установлено, что представители онкорнавирусов 5 основных субгрупп (А, В, С, D и Е) иммунологически неотличимы по р27 при гомологичном типировании, осуществляемом с помощью радиоиммунологического теста. Напротив, у каждого из трех низкомолекулярных вирусных полипептидов (р19, р15, р12) выявлены типоспецифические детерминанты. Оказалось, что представители субгрупп А, В и Е содержат идентичную генетическую информацию, ответственную за синтез низкомолекулярных…

SSV и GLV приматов относятся ко II классу экзогенных вирусов С-типа, так как оба вируса были изолированы из опухолей обезьян и онкогенны для своих хозяев, т. е. при инъекциях индуцируют неоплазии. Геном этих вирусов не имеет комплементарных последовательностей в ДНК клеток приматов, передается горизонтально и обнаруживается в лимфомах, саркомах и при лейкозах. Ревертазы этих вирусов…

Масса вирионов онкорнавирусов равна приблизительно 450X106. Вирионы термолабильны и инактивируются эфиром и другими растворителями липидов, так как окружены мембраной, содержащей значительное количество липидов. Например, в состав вириона миелобластоза птиц входит 2,5% РНК, 35% липидов и около 60% белка. Вирус Биттнера содержит 30% липидов, 2% РНК и 68 белка. Фосфолипиды вирионов онкорнавирусов значительно отличаются по составу…