Исследования индивидуальных белков вириона онкорнавирусов

Современный метод исследования индивидуальных белков вириона онкорнавирусов включает предварительную деструкцию вирусных частиц с последующим разделением белков разными способами.

Среди последних можно указать на фильтрацию в гуанидин-HCl (наиболее корректные результаты получены для белков с молекулярной массой 10 — 30X10³), электрофорез в полиакриламидном геле (наиболее четкие данные получены для белков с молекулярной массой 30 — 100Х10³), ионообменную хроматографию.

Ионообменная хроматография в сочетании с предварительной деструкцией вирионов, которая достигается путем многократных замораживаний — оттаиваний, — наиболее оптимальный метод для получения высокой степени очистки вирусных белков с сохранением их антигенной активности.

В настоящее время с помощью современных методов у онкорнавирусов С-типа птиц выделены 7 белков: основной гликопротеид, связанный одной или более дисульфидной связью в агрегированную структуру, которая содержит по одной молекуле gp 85ts и gp 37ts; основной антигенный компонент gs-комплекса р27 gs; три неглюколизированных белка с подгрупповой антигенной специфичностью (р19 sub-gs, pl5 sub-gs и р12 sub-gs) и р10. Ковалентная связь между gp85ts и gp37ts в гликопротеидном комплексе образуется внутри клеток до освобождения вируса в культуральную среду (Leamnson, Halpern, 1976).

Таким образом, 4 обычных белка, характеризующиеся групповой и подгрупповой антигенностью, ассоциированы с вирусным нуклеоидом и два гликопротеида, обладающие ts-специфичностью, локализованы на поверхности вириона.

Углеводный компонент гликопротеидов птичьих онкорнавирусов составляет около 20% массы и представлен глюкозамином, маннозой, галактозой, фукозой и сиаловой кислотой.

Установлено, что gp85, обладающий свойствами сильно кислого белка, наряду с типовой антигенностью имеет групповые антигенные детерминанты, правда, в значительно меньшем количестве. В противоположность этому у каждого из трех низкомолекулярных полипептидов (р19, р15 и р12) выявлены типоспецифические детерминанты. По этим критериям онкорна-вирусы С-типа птиц сходны с вирусами С-типа мышей, у которых низкомолекулярные белки также обладают ts-активностью. Следует отметить, что у разных белков антигенность типовых и групповых детерминант различна.

С помощью конкурентного радиоиммунологического теста показано, что представители 5 основных субгрупп онкорнавирусов птиц иммунологически неотличимы от AMVp27gs по этим белкам. Вместе с тем оказалось, что вирусы С- и D-субгрупп по низкомолекулярным белкам (р19, р15 и р12) отличаются от вирусов субгрупп А, В и Е при гомологичном типировании с помощью радиоиммунологического метода.

Следовательно, представители субгрупп А, В и Е несут идентичную генетическую информацию, ответственную за синтез вирусных низкомолекулярных полипептидов.

Из ALV подтипа А и RSV-штаммов подгрупп В и С получены рекомбинанты, которые в 14 из 17 случаев имели р19 RSV. У рекомбинантов обнаружен ген поверхностного гликопротеида подгруппы А и саркоматозный ген вирусов подгрупп В и С (Hayman, Vogt, 1976).

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко