18 апреля 2012

Электронно-микроскопический анализ изображений гетеродуплексов с последующей ДНК — ДНК-гибридизацией

Электронно-микроскопический анализ изображений гетеродуплексов с последующей ДНК — ДНК-гибридизацией показал, что Д-ДНК в основной массе представляют собой не просто О-ДНК с делециями, а содержат специфические последовательности, не гибридизирующиеся с О-ДНК.

Эти последовательности ковалентно связаны с ограниченным набором гибридизирующихся последовательностей. Причем в некоторых Д-ДНК вообще не идентифицировано последовательностей, гомологичных к О-ДНК.

Считают, что негибридизирующиеся участки в различных клоновых Д-ДНК могут как образовываться последовательностями ДНК клетки-хозяина, так и состоять из транслоцированных обратных или повторяющихся вирусных последовательностей.

Фрагменты клеточной ДНК, встроенные в вирусный геном, различны у разных вариантов Д-ДНК. Это свидетельствует о том, что рекомбинация между вирусным геномом и клеточной ДНК при литической инфекции осуществляется в нескольких участках.

С помощью метода молекулярной гибридизации показано, что клеточные фрагменты в дефектных вирионах распределены между повторяющимися сегментами вирусного генома и представляют собой как повторяющиеся, так и уникальные последовательности в отношении 1 : 3. Они не попадают в вирус вследствие случайной селекции всех последовательностей генома клеток-хозяина.

Таким образом, дефектные эволюционные варианты паповавирусов образуются в результате «вырезания» некоторых участков вирусного генома, интегрированного в клеточную ДНК и содержащего замещения из фрагментов ДНК хозяина, и последующей амплификации специфичных последовательностей вирусных ДНК до размеров, необходимых для инкапсуляции в частицы.

Исследование природы и внутримолекулярной локализации тандемно повторяющихся последовательностей ДНК неинфекционных дефектных вирусных частиц показало, что основная их часть происходит из той части генома, в которой локализуется участок (фрагменте) инициации процесса репликации (0,67 ед. карты).

Иными словами, все мутанты SV40 с повторами сохраняют и амплифицируют область репликации вирусной ДНК (Davoli et al., 1977). Наличие же нескольких копий фрагмента С создает преимущества в репликации таких дефектных молекул, которые реплицируются значительно быстрее не дефектных молекул ДНК.

Вместе с тем, несмотря на появление у эволюционных вариантов нескольких точек инициации, репликация ДНК начинается только в одной точке. Этот феномен можно объяснить существованием какого-либо лимитирующего фактора, необходимого для инициации. Возможно, что это продукт гена ASV40.

Наличие тандемно повторяющихся репликонов делает ДНК таких мутантов SV40 более активными в репликации. Это и послужило поводом для исследования их по аналогии с бактериальными плазмидами и репликоном фага X в качестве молекул-векторов для переноса, размножения и клонирования чужеродных прокариотических ДНК в животных клетках.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Вирус Эпштейна — Барр (ВЭБ) систематически продуцируется клетками африканской лимфомы Беркитта в культуре и обнаруживается при электронно-микроскопическом исследовании. В небольшом проценте случаев ВЭБ синтезируют клетки лимфобластоидных линий. В некоторых клеточных линиях и биопсийном материале из лимфом Беркитта вирионы ВЭБ не определяются. По-видимому, синтез полных вирусных частиц начинается после эксплантации клеток лимфомы в культуру, что сопровождается…

В лимфобластных клетках, несущих геном ВЭБ, синтезируется не менее 4 групп белков, ассоциированных с вирусом: Ядерный антиген (ЭBNA), по-видимому, аналогичен Т-антигену папова- и аденовирусов. Он обнаруживается с помощью РСК. Однако в отличие от Т-антигена папова- и аденовирусов ЭБНА прочно связан с хроматином и не отделяется от хромосом в процессе митоза (Luka et al., 1977).  Химическая…

В обширных сероэпидемиологических исследованиях установлено, что высокие титры антител к ВЭБ чаще всего выявляются при двух злокачественных новообразованиях человека — лимфоме Беркитта и НФК, для которых характерно особое географическое распространение. Лимфома Беркитта встречается преимущественно в определенных районах экваториальной Африки и Новой Гвинеи, а карцинома носоглотки — наиболее частая злокачественная опухоль населения в некоторых областях Южного…

Вирус герпеса саймири выделен из почечной культуры здоровой беличьей обезьяны, а вирус герпеса ателес — от здоровых паукообразных обезьян. Для обоих вирусов фибробласты и эпителиальные клетки обезьян являются пермиссивной системой, в ней вирусы размножаются с цитопатогенным эффектом и могут быть получены в больших количествах. Оба вируса распространяются горизонтально и очень широко охватывают популяции природных хозяев,…

К этой группе относятся вирусы простого герпеса (Herpes simplex) 1-го и 2-го типов (HSV1 и HSV2) и вирусы цитомегалии, обладающие трансформирующей активностью in vitro. HSV1 и HSV2 индуцируют опухоли у хомяков при введении новорожденным животным. ДНК HSV (молекулярная масса 96Х106) состоит из областей, названных А, В, С, L и S, которые организованы в последовательности АВ…