18 апреля 2012

Электронно-микроскопический анализ изображений гетеродуплексов с последующей ДНК — ДНК-гибридизацией

Электронно-микроскопический анализ изображений гетеродуплексов с последующей ДНК — ДНК-гибридизацией показал, что Д-ДНК в основной массе представляют собой не просто О-ДНК с делециями, а содержат специфические последовательности, не гибридизирующиеся с О-ДНК.

Эти последовательности ковалентно связаны с ограниченным набором гибридизирующихся последовательностей. Причем в некоторых Д-ДНК вообще не идентифицировано последовательностей, гомологичных к О-ДНК.

Считают, что негибридизирующиеся участки в различных клоновых Д-ДНК могут как образовываться последовательностями ДНК клетки-хозяина, так и состоять из транслоцированных обратных или повторяющихся вирусных последовательностей.

Фрагменты клеточной ДНК, встроенные в вирусный геном, различны у разных вариантов Д-ДНК. Это свидетельствует о том, что рекомбинация между вирусным геномом и клеточной ДНК при литической инфекции осуществляется в нескольких участках.

С помощью метода молекулярной гибридизации показано, что клеточные фрагменты в дефектных вирионах распределены между повторяющимися сегментами вирусного генома и представляют собой как повторяющиеся, так и уникальные последовательности в отношении 1 : 3. Они не попадают в вирус вследствие случайной селекции всех последовательностей генома клеток-хозяина.

Таким образом, дефектные эволюционные варианты паповавирусов образуются в результате «вырезания» некоторых участков вирусного генома, интегрированного в клеточную ДНК и содержащего замещения из фрагментов ДНК хозяина, и последующей амплификации специфичных последовательностей вирусных ДНК до размеров, необходимых для инкапсуляции в частицы.

Исследование природы и внутримолекулярной локализации тандемно повторяющихся последовательностей ДНК неинфекционных дефектных вирусных частиц показало, что основная их часть происходит из той части генома, в которой локализуется участок (фрагменте) инициации процесса репликации (0,67 ед. карты).

Иными словами, все мутанты SV40 с повторами сохраняют и амплифицируют область репликации вирусной ДНК (Davoli et al., 1977). Наличие же нескольких копий фрагмента С создает преимущества в репликации таких дефектных молекул, которые реплицируются значительно быстрее не дефектных молекул ДНК.

Вместе с тем, несмотря на появление у эволюционных вариантов нескольких точек инициации, репликация ДНК начинается только в одной точке. Этот феномен можно объяснить существованием какого-либо лимитирующего фактора, необходимого для инициации. Возможно, что это продукт гена ASV40.

Наличие тандемно повторяющихся репликонов делает ДНК таких мутантов SV40 более активными в репликации. Это и послужило поводом для исследования их по аналогии с бактериальными плазмидами и репликоном фага X в качестве молекул-векторов для переноса, размножения и клонирования чужеродных прокариотических ДНК в животных клетках.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Из пяти групп известных в настоящее время ДНК-содержащих вирусов только одна группа Parvo (мелкие с однонитевой молекулой ДНК и кубическим типом симметрии) не имеет представителей в семействе онковирусов. Важно отметить, что число онкогенных типов в каждой из четырех групп возрастает по мере исследования их потенциальной трансформирующей способности In vivo и in vitro. Результаты сероэпидемиологических исследований…

Установлено, что продуктивная инфекция и трансформация клеток под действием ДНК-содержащих онковирусов обычно взаимоисключают друг друга: клетки природного хозяина главным образом продуктивно инфицируются (пермиссивные клетки), в то время как клетки другого вида чаще трансформируются (непермиссивные клетки). Однако не всегда пермиссивность обусловливается «природной» клеточной системой, иногда онковирусы могут обладать довольно широким спектром цитопатогенного действия на клетки других…

Вирус Эпштейна — Барр (ВЭБ) систематически продуцируется клетками африканской лимфомы Беркитта в культуре и обнаруживается при электронно-микроскопическом исследовании. В небольшом проценте случаев ВЭБ синтезируют клетки лимфобластоидных линий. В некоторых клеточных линиях и биопсийном материале из лимфом Беркитта вирионы ВЭБ не определяются. По-видимому, синтез полных вирусных частиц начинается после эксплантации клеток лимфомы в культуру, что сопровождается…

В лимфобластных клетках, несущих геном ВЭБ, синтезируется не менее 4 групп белков, ассоциированных с вирусом: Ядерный антиген (ЭBNA), по-видимому, аналогичен Т-антигену папова- и аденовирусов. Он обнаруживается с помощью РСК. Однако в отличие от Т-антигена папова- и аденовирусов ЭБНА прочно связан с хроматином и не отделяется от хромосом в процессе митоза (Luka et al., 1977).  Химическая…

В обширных сероэпидемиологических исследованиях установлено, что высокие титры антител к ВЭБ чаще всего выявляются при двух злокачественных новообразованиях человека — лимфоме Беркитта и НФК, для которых характерно особое географическое распространение. Лимфома Беркитта встречается преимущественно в определенных районах экваториальной Африки и Новой Гвинеи, а карцинома носоглотки — наиболее частая злокачественная опухоль населения в некоторых областях Южного…