Полные и дефектные геномы паповавирусов В (эволюционные варианты)

В настоящее время наиболее всесторонне и детально изучены вирусы PY и SV40. Инфекционные и онкогенные варианты вирусных частиц имеют единственную двойную циркулярную молекулу ДНК с содержанием Г+Ц 41 — 48%. Масса частиц SV40 равна 17Х10⁶, а молекулярная масса ДНК — 2,3 — 2,5Х10⁶. Частицы вируса полиомы тяжелее частиц SV40 и молекулярная масса их ДНК составляет 2,9 — 3,4Х10⁶.

ДНК, экстрагированная из очищенных вирусных частиц, содержит три компонента:

1. суперспирализованную двойную циркулярную ДНК с константой седиментации 20 — 21S, составляющую 70 — 90% от всей ДНК вируса (ДНК I);
2. двойную циркулярную с разорванной одной нитью, имеющую константу седиментации 16S и, вероятно, образующуюся из первого компонента ДНК в процессе экстракции (ДНК II),
3. развернутую биспиральную цепь (ДНК III). В вирусные частицы вместо вирусной ДНК (псевдовирионы) включаются линейные фрагменты до 20% клеточной ДНК, деградированные в процессе инфекции, с константой седиментации 12 — 14S и молекулярной массой ЗХ10⁶.

Линейные формы ДНК III могут содержать как клеточные, так и вирусные нуклеотидные последовательности (Gruss, Sauer, 1977). Часть молекул ДНК III инфекционная и при введении ее в пермиссивные клетки может образовывать ДНК I, содержащую указанные выше последовательности. В зараженной клетке ДНК III индуцирует синтез Т-антигена и вирусных капсидных белков.

Результаты анализа подвижности рестрикционных фрагментов ДНК у биологически активных штаммов SV40 позволили установить, что делеция (нехватка сегмента) в их геномах расположена между 0,68 и 0,73 ед. карты ДНК этого вируса.

Величина такой делеции составляет около 75±10пар оснований ДНК (геном SV40 содержит всего около 55 000 пар оснований).

Эта несущественная часть генома лежит в поздней области и не влияет как на вегетативный рост, так и на трансформирующую способность вируса (Waldeck, Sauer, 1976).

Инфицирование вирусами PY и SV40 соответствующих чувствительных клеток с высокой множественностью заражения, сопровождающееся рекомбинациоными процессами, приводит к внутриклеточному образованию специфического класса замкнутых кольцевых укороченных и гетерогенных молекул ДНК с более низкой, чем у обычных вирусных ДНК (О-ДНК), плавучей плотностью.

Из этих молекул впоследствии формируются «легкие» вирионы. Подобные «облегченные» частицы описаны и у аденовирусов.

Используя то обстоятельство, что дефектные ДНК (Д-ДНК) представляют собой сверхспиральные молекулы, их можно выделить из индивидуальных клоповых изолятов и отделить от О-ДНК в градиенте CsCl — этидийбромид. Средняя контурная длина Д-ДНК в разных клеточных клонах составляет 47 — 92% от длины недефектной ДНК.

Установлено, что ДНК возникают в результате либо только делении вирусных последовательностей, достигающей 15 — 30% от длины молекулы О-ДНК, либо делеции и вставки фрагментов клеточной ДНК, которая осуществляется при интеграции ДНК мелких онковирусов с хромосомной ДНК и последующем выщеплении вирусной ДНК с фрагментом клеточной. Как в том, так и другом случае может происходить дупликация вирусных последовательностей.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко