18 апреля 2012

Полные и дефектные геномы паповавирусов В (эволюционные варианты)

В настоящее время наиболее всесторонне и детально изучены вирусы PY и SV40. Инфекционные и онкогенные варианты вирусных частиц имеют единственную двойную циркулярную молекулу ДНК с содержанием Г+Ц 41 — 48%. Масса частиц SV40 равна 17Х106, а молекулярная масса ДНК — 2,3 — 2,5Х106. Частицы вируса полиомы тяжелее частиц SV40 и молекулярная масса их ДНК составляет 2,9 — 3,4Х106.

ДНК, экстрагированная из очищенных вирусных частиц, содержит три компонента:

  1. суперспирализованную двойную циркулярную ДНК с константой седиментации 20 — 21S, составляющую 70 — 90% от всей ДНК вируса (ДНК I);
  2. двойную циркулярную с разорванной одной нитью, имеющую константу седиментации 16S и, вероятно, образующуюся из первого компонента ДНК в процессе экстракции (ДНК II),
  3. развернутую биспиральную цепь (ДНК III). В вирусные частицы вместо вирусной ДНК (псевдовирионы) включаются линейные фрагменты до 20% клеточной ДНК, деградированные в процессе инфекции, с константой седиментации 12 — 14S и молекулярной массой ЗХ106.

Линейные формы ДНК III могут содержать как клеточные, так и вирусные нуклеотидные последовательности (Gruss, Sauer, 1977). Часть молекул ДНК III инфекционная и при введении ее в пермиссивные клетки может образовывать ДНК I, содержащую указанные выше последовательности. В зараженной клетке ДНК III индуцирует синтез Т-антигена и вирусных капсидных белков.

Результаты анализа подвижности рестрикционных фрагментов ДНК у биологически активных штаммов SV40 позволили установить, что делеция (нехватка сегмента) в их геномах расположена между 0,68 и 0,73 ед. карты ДНК этого вируса.

Величина такой делеции составляет около 75±10пар оснований ДНК (геном SV40 содержит всего около 55 000 пар оснований).

Эта несущественная часть генома лежит в поздней области и не влияет как на вегетативный рост, так и на трансформирующую способность вируса (Waldeck, Sauer, 1976).

Инфицирование вирусами PY и SV40 соответствующих чувствительных клеток с высокой множественностью заражения, сопровождающееся рекомбинациоными процессами, приводит к внутриклеточному образованию специфического класса замкнутых кольцевых укороченных и гетерогенных молекул ДНК с более низкой, чем у обычных вирусных ДНК (О-ДНК), плавучей плотностью.

Из этих молекул впоследствии формируются «легкие» вирионы. Подобные «облегченные» частицы описаны и у аденовирусов.

Используя то обстоятельство, что дефектные ДНК (Д-ДНК) представляют собой сверхспиральные молекулы, их можно выделить из индивидуальных клоповых изолятов и отделить от О-ДНК в градиенте CsCl — этидийбромид. Средняя контурная длина Д-ДНК в разных клеточных клонах составляет 47 — 92% от длины недефектной ДНК.

Установлено, что ДНК возникают в результате либо только делении вирусных последовательностей, достигающей 15 — 30% от длины молекулы О-ДНК, либо делеции и вставки фрагментов клеточной ДНК, которая осуществляется при интеграции ДНК мелких онковирусов с хромосомной ДНК и последующем выщеплении вирусной ДНК с фрагментом клеточной. Как в том, так и другом случае может происходить дупликация вирусных последовательностей.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Вирус герпеса саймири выделен из почечной культуры здоровой беличьей обезьяны, а вирус герпеса ателес — от здоровых паукообразных обезьян. Для обоих вирусов фибробласты и эпителиальные клетки обезьян являются пермиссивной системой, в ней вирусы размножаются с цитопатогенным эффектом и могут быть получены в больших количествах. Оба вируса распространяются горизонтально и очень широко охватывают популяции природных хозяев,…

К этой группе относятся вирусы простого герпеса (Herpes simplex) 1-го и 2-го типов (HSV1 и HSV2) и вирусы цитомегалии, обладающие трансформирующей активностью in vitro. HSV1 и HSV2 индуцируют опухоли у хомяков при введении новорожденным животным. ДНК HSV (молекулярная масса 96Х106) состоит из областей, названных А, В, С, L и S, которые организованы в последовательности АВ…

Инактивированные ультрафиолетовым облучением вирусы герпеса 1-го и 2-го типов трансформируют клетки хомяков, крыс и мышей, которые при имплантации соответствующим животным вызывают у них метастазирующие опухоли. Однако, хотя у таких животных появляются вируснейтрализующие антитела, в опухолевой ткани вирусная ДНК, как правило, не определяется. В сыворотках крови животных с опухолями выявлен фактор, угнетающий цитотоксичность лимфоцитов по отношению…

При непермиссивных условиях (повышенная температура) интактный вирус HSV1 in vitro, по-видимому, трансформирует клетки легкого человека. Итак, HSV2 имеет четко выраженное сродство к генитальным органам и, вероятно, передается половым путем. Вместе с тем встречаются больные раком шейки матки, в организме которых антител к вирусу нет. HSV1 ассоциирован с кожей и слизистой губ и носоглотки. Оба вируса…

Из пяти групп известных в настоящее время ДНК-содержащих вирусов только одна группа Parvo (мелкие с однонитевой молекулой ДНК и кубическим типом симметрии) не имеет представителей в семействе онковирусов. Важно отметить, что число онкогенных типов в каждой из четырех групп возрастает по мере исследования их потенциальной трансформирующей способности In vivo и in vitro. Результаты сероэпидемиологических исследований…