14 декабря 2010

Гистохимические методы исследования

Гистохимические методы исследования в основном применяются для научных целей, однако некоторые из них имеют диагностическое значение, как, на пример, ШИК-реакция, окраска альциановым голубым или толуидиновым синим, азаном по методу Гейденгайна и др.

С помощью ШИК-реакции выявляют полисахариды: гликоген и муконолисахариды (МПС), особенно нейтральные. Эта реакция необходима для определения ШИК-положительных фибриноида и фибрина. Грибы и хитиновые оболочки паразитов также дают ШИК-положительную реакцию.

Для отличия нейтральных МПС и грибов от отложения гликогена делают две серии срезов, один из которых обрабатывают диастазой. Дифференциация основана на том, что гликоген диастозолабилен, а нейтральные МПС и трибы диастазорезистентны.

Наличие гликогена часто является диагностическим признаком таких заболеваний, как опухоли фолликулов волос (светло-клеточная гидроаденома и эккринная порома), все клетки эпителиальных влагалищ и потовых желез при этом содержат его в большом количестве. Нейтральные МПС обнаруживают при болезни Педжета, светлоклеточной гидроаденоме, эккринной снираденоме и эккринной пороме.

При окраске альциановым голубым или толуидиновым синим выявляют гликозамногликаны, которые присутствуют в небольшом количестве в основной субстанции кожи и в норме. Эта окраска позволяет определить тиалуроновую кислоту и муцин.

Муцин содержится в железистых образованиях при болезни Педжета, в фолликулах при фолликулярном муцинозе, вокруг фолликулов при муцинозном облысении, метастазах аденокарциномы из органов пищеварительного тракта.

Гликозаминогликаны, кроме того, обнаруживают в тканевых базофилах (тучных клетках), а гликозаминогликаны типа гиалуроновой кислоты — в дерме при коллагенозах (красная волчанка, склеродермия и др.). Для идентификации гликозаминогликанов необходимо производить обработку контрольных срезов тиалуронидазой.

Для этого их опускают в тестикулярную гиалуронидазу (50 мг), приготовленную на изотоническом растворе хлорида натрия (50 мг), и помещают на 3 ч в термостат при температуре 37 °С, затем окрашивают толуидиновым синим. Метахромазия, обусловленная гиалуроновой кислотой, исчезает после обработки гиалуронидазой, хондроитинсульфаты при этом не разрушаются.

Приводим описание нескольких гистохимических методов диагностики некоторых кожных заболеваний в нашей модификации.

«Патоморфологическая диагностика заболеваний кожи»,
Г.М.Цветкова, В.К.Мордовцев

Читайте далее:



Фиксация различная. Парафиновые срезы на сутки помещают в 3% раствор перекиси водорода, затем на 15 — 20 мин в карболовый гематоксилин (гематоксилин 1,75 г + 200 мл дистиллированной воды + 5 г кристаллической карболовой кислоты + 10 мл 10% фосфорно-вольфрамовой кислоты), ополаскивают дистиллированной водой, дифференцируют в 10% растворе фосфорно-вольфрамовой кислоты (до 1 сут), несколько часов…

Измельченные кусочки подвергаются предварительной фиксации в 4% глютаральдегиде, забуференном 0,1 М какодилатным буфером (рН 7,3) в течение 2 ч при температуре 4 °С. Хорошие результаты дает также применение 0,1 М фосфатного буфера (рН 7,3). Затем кусочки промывают в 0,2 М растворе сахарозы па какодилатном буфере в течение 12 ч и фиксируют в течение 2 ч…

Фиксация особенного значения не имеет, срезы можно приготовить на замораживающем микротоме, а также после заливки в парафин. Перед окрашиванием их помещают в изотонический раствор хлорида натрия на 3 ч при температуре 37 °С, затем переносят в 0,5% раствор толуидинового синего на 18 ч. После этого срезы быстро промывают в трижды сменяемой дистиллированной воде, высушивают фильтровальной…

Биопсию кожи лучше производить циркулярным полном, который значительно упрощает взятие материала и не травмирует прилежащие участки. Для постановки патологоанатомического диагноза большое значение имеют правильная фиксация и последующая обработка биопсированного кусочка кожи. Лучшим фиксатором для обычных гистологических целей является 10% нейтральный формалин. Его количество должно превышать в 50 раз объем биоптата. Так, биоптат размером 1 X…

Метод Шифф — йодная кислота применяется для выявления гликогена и нейтральных МПС. Наиболее распространена модификация Хочкисса и МакМануса. Фиксация и способы приготовления срезов различны. Срезы из дистиллированной воды переносят на 15 мин в раствор нерйодата натрия или калия (350 мг перйодата калия или натрия + 50 мл дистиллированной воды + 0,5 мл 35% азотной кислоты),…