14 декабря 2010

Гистохимические методы исследования

Гистохимические методы исследования в основном применяются для научных целей, однако некоторые из них имеют диагностическое значение, как, на пример, ШИК-реакция, окраска альциановым голубым или толуидиновым синим, азаном по методу Гейденгайна и др.

С помощью ШИК-реакции выявляют полисахариды: гликоген и муконолисахариды (МПС), особенно нейтральные. Эта реакция необходима для определения ШИК-положительных фибриноида и фибрина. Грибы и хитиновые оболочки паразитов также дают ШИК-положительную реакцию.

Для отличия нейтральных МПС и грибов от отложения гликогена делают две серии срезов, один из которых обрабатывают диастазой. Дифференциация основана на том, что гликоген диастозолабилен, а нейтральные МПС и трибы диастазорезистентны.

Наличие гликогена часто является диагностическим признаком таких заболеваний, как опухоли фолликулов волос (светло-клеточная гидроаденома и эккринная порома), все клетки эпителиальных влагалищ и потовых желез при этом содержат его в большом количестве. Нейтральные МПС обнаруживают при болезни Педжета, светлоклеточной гидроаденоме, эккринной снираденоме и эккринной пороме.

При окраске альциановым голубым или толуидиновым синим выявляют гликозамногликаны, которые присутствуют в небольшом количестве в основной субстанции кожи и в норме. Эта окраска позволяет определить тиалуроновую кислоту и муцин.

Муцин содержится в железистых образованиях при болезни Педжета, в фолликулах при фолликулярном муцинозе, вокруг фолликулов при муцинозном облысении, метастазах аденокарциномы из органов пищеварительного тракта.

Гликозаминогликаны, кроме того, обнаруживают в тканевых базофилах (тучных клетках), а гликозаминогликаны типа гиалуроновой кислоты — в дерме при коллагенозах (красная волчанка, склеродермия и др.). Для идентификации гликозаминогликанов необходимо производить обработку контрольных срезов тиалуронидазой.

Для этого их опускают в тестикулярную гиалуронидазу (50 мг), приготовленную на изотоническом растворе хлорида натрия (50 мг), и помещают на 3 ч в термостат при температуре 37 °С, затем окрашивают толуидиновым синим. Метахромазия, обусловленная гиалуроновой кислотой, исчезает после обработки гиалуронидазой, хондроитинсульфаты при этом не разрушаются.

Приводим описание нескольких гистохимических методов диагностики некоторых кожных заболеваний в нашей модификации.

«Патоморфологическая диагностика заболеваний кожи»,
Г.М.Цветкова, В.К.Мордовцев

Читайте далее:



Фиксация особенного значения не имеет, срезы можно приготовить на замораживающем микротоме, а также после заливки в парафин. Перед окрашиванием их помещают в изотонический раствор хлорида натрия на 3 ч при температуре 37 °С, затем переносят в 0,5% раствор толуидинового синего на 18 ч. После этого срезы быстро промывают в трижды сменяемой дистиллированной воде, высушивают фильтровальной…

Биопсию кожи лучше производить циркулярным полном, который значительно упрощает взятие материала и не травмирует прилежащие участки. Для постановки патологоанатомического диагноза большое значение имеют правильная фиксация и последующая обработка биопсированного кусочка кожи. Лучшим фиксатором для обычных гистологических целей является 10% нейтральный формалин. Его количество должно превышать в 50 раз объем биоптата. Так, биоптат размером 1 X…

Метод Шифф — йодная кислота применяется для выявления гликогена и нейтральных МПС. Наиболее распространена модификация Хочкисса и МакМануса. Фиксация и способы приготовления срезов различны. Срезы из дистиллированной воды переносят на 15 мин в раствор нерйодата натрия или калия (350 мг перйодата калия или натрия + 50 мл дистиллированной воды + 0,5 мл 35% азотной кислоты),…

Срезы, полученные из материала, фиксированного разными способами, помещают в 12% нейтральный формалин на 1 сут, после чего ополаскивают их дистиллированной водой и оставляют в ней на 10 — 15 мин. Затем срезы переносят в раствор перманганата калия (100 мг перманганата калия + 40 мг дистиллированной воды) на 10 мни, хорошо отмывают в нескольких порциях дистиллированной…

В 40 мл дистиллированной воды растворяют 80 мг нитрата серебра. К 10 мл раствора прибавляют 8 капель 40% гидроокиси натрия до получения осадка. Затем по каплям продолжают добавлять аммиак до растворения осадка, после чего до 40 доливают дистиллированную воду. Раствор должен быть бесцветным. Окраска азокармином по методу Гейденгайна выявляет белки соединительной ткани и плазмы крови….