Макромолекулярные механизмы биологического взаимодействия онковирусов с клеткой

Интеграция и хромосомная локализация вирусных геновКовалентная интеграция вирусного и клеточного геномов, приводящая к образованию единой генетической структуры, является твердо установленным фактом для онковирусов группы папова, аденовирусов и онкорнавирусов. В отношении вирусов группы герпеса показано, что устойчивые к действию щелочей связи между вирусной и клеточной ДНК отсутствуют, хотя при их взаимодействии могут происходить щелочнолабильные нековалентные связи….

Использование кинетики реассоциации меченой вирусной ДНК в присутствии немеченой ДНК из нормальных и трансформированных вирусом полиомы и SV40 клеток хомяка и мыши позволило определить число вирусных ДНК-копий. Для исследованных культур оно колебалось от 1 до 8,75 в расчете на диплоидный геном, в среднем выявляются два геномных эквивалента вируса. Однако, как выяснилось, частота встречаемости каждого из…

После обработки EcoRI ДНК А12 выделен фрагмент С (16% левой части вирусного генома). При использовании ДНК-полимеразы из Е. coli на матрице ДНК А12 и С-фрагмента in vitro синтезирован ДНК-продукт, с помощью которого был осуществлен анализ на присутствие в геноме опухолевых клеток человека и грызунов последовательностей ДНК А12, в том числе и трансформирующих. В первую очередь…

Показана идентичность геномов ВЭБ, обнаруживаемых в клетках лимфомы Беркитта, карциноме носоглотки и при инфекционном мононуклеозе. Вирусная ДНК из клеток карциномы носоглотки в градиенте глицерина разделялась на два компонента: 101S и 64S, т. е. на ковалентнозамкнутую и открытую циркулярную формы ДНК соответственно. Наличие полноценных ковалентнозамкнутых форм вирусной ДНК подтверждено также электронной микроскопией. Молекулярная масса циркулярных ДНК…

Фрагменты ДНК SV40, обладающие трансформирующей активностью, содержат один ранний А-ген, включающий 48% емкости генома. Эндорестриктаза Нра I, которая вызывает разрыв в ранней области, блокирует трансформирующую активность генома SV40. Фрагмент В (0,375 — 0,735 ед. карты) составляет 36% генома и содержит около 60% его ранней области, кодирующей синтез полипептида с молекулярной массой 40 000 — 50…

Картирование ранней цитоплазматической мРНК вируса PY показало, что 5´-конец располагается на границе Е- и С-фрагментов ДНК, полученных при помощи ре-стриктазы Нра II, в точке 72 ед. карты от точки разрыва Е. coli RI, а 3´-конец — во фрагменте на расстоянии 25 — 26 ед. карты. Ядра из клеток ЗТЗ (пермиссивная система) через 30 ч после…

При составлении генетических карт онкогенных вариантов аденовирусов использовали те же самые экспериментальные подходы, что и для мелких ДНК-содержащих онковирусов. При действии рестриктазы Е. coli RI на ДНК аденовируса человека 2-го типа образуется 6 фрагментов, последовательность которых в геноме А2 известна. Обнаружено, что ранние мРНК, содержащие поли-А-последовательности, транскрибировались в основном с А-, В- и D-фрагментов ДНК…

Установлено, что репликация ДНК начинается внутри специфического участка на сегменте Н. influenzae С, т. е. в 0,67 ед. карты (в области 0,655 — 0,68 ед.). Затем синтез идет в обе стороны циркулярной молекулы примерно с одинаковой скоростью и терминируется внутри сегмента Н. influenzae G (0,15 ед. карты). Для определения участков синтеза ранних и поздних РНК…

С помощью рестриктазы Нае III установлено, что в геноме SV40 имеется участок длиной около 140 нуклеотидов, вариации в котором и вызывают основные изменения в свойствах вирусных частиц (Newbold, 1976). Пока этот фрагмент еще точно не локализован, по-видимому, он ассоциирован с участком, кодирующим поздние функции. Не получено прямых доказательств в пользу транскрипции этой части генома, однако…

Паповавирусы За последние годы разработаны следующие методики исследования молекулярно-генетической структуры генома SV40: анализ функций фрагментов ДНК SV40 различной длины, интегрированных в определенные участки некоторых аденовирусных генов (недефектные гибриды Ad2+XSV40); эта система рассматривается как модель взаимодействия SV40 с ДНК клетки-хозяина, специфические разрывы молекул ДНК SV40 с помощью ограничивающих бактериальных эндонуклеаз (рестриктаз). Кроме того, наличие асимметрического неодновременного…

Влияние физиологического состояния клетки на репродуктивный цикл различных вирусов исследуют на синхронизированных тем или иным способом культурах. Заражают такие культуры в различных периодах клеточного цикла и учитывают время появления инфекционного вируса или определенных вирусных продуктов, сопоставляя результаты с фазой клеточного цикла. Таким способом, например, установлена зависимость продолжительности латентного периода от стадии клеточного цикла, на которой…

Установлено, что для осуществления автономной репликации ДНК паповавирусов необходимо сочетание следующих условий: экспрессии вирусного гена, контролирующего автономную репликацию вирусной ДНК, сопутствующего синтеза белка в течение всего цикла репликации, наличия клеточных факторов, необходимых для репликации. Известно, что компонент I паповавирусов представляет собой сверхспирализованную вирионную молекулу ДНК, неактивную в генетическом отношении, т. е. неспособную в таком виде…