5 июля 2012

Репликация ДНК

Установлено, что репликация ДНК начинается внутри специфического участка на сегменте Н. influenzae С, т. е. в 0,67 ед. карты (в области 0,655 — 0,68 ед.).

Затем синтез идет в обе стороны циркулярной молекулы примерно с одинаковой скоростью и терминируется внутри сегмента Н. influenzae G (0,15 ед. карты).

Для определения участков синтеза ранних и поздних РНК использовали препараты клеточной РНК, выделенной на разных стадиях инфекции (Subramanian et al., 1977). Эту РНК гибридизировали с плюс- и минус-нитями отдельных фрагментов. Оказалось, что ранние гены расположены на фрагментах В (частично I, H) и А (частично) в пределах 0,27 — 0,56 ед. карты на минус-Е-нити. Поздние гены локализованы на фрагментах А (частично), С, D, Е, К, F, J, G и В (частично) на противоположной плюс-L-нити на остальной части генома.

Для фрагментов Н и J, расположенных в середине ранней области транскрипции, получена перекрестная гибридизация с поздними мРНК. Гибридизацией с интактными нитями или фрагментами нитей и избытком денатурированной вирусной ДНК или ДНК трансформированных клеток показана возможность определения уникальных участков вирусного генома.

Транскрибируемые фрагменты как для ранней, так и для поздней РНК непрерывны на генетической карте SV40.

Транскрипция на минус-Е-нити (ранняя матрица) осуществляется от 5´- к З´-концу молекулы в направлении А→Н→I→В, т. е. против часовой стрелки на карте генома SV40, а на плюс-L-нити (поздняя матрица) в противоположном направлении.

Переключение синтеза с одной нити на другую происходит в положениях 55 и 24. Такая ситуация наблюдалась, если для гибридизации использовали полисомальную РНК. Если же для гибридизации применяли тотальную цитоплазматическую РНК, то эта РНК имела молекулы, комплементарные 80 — 85% L-нити и 44% Е-нити ДНК SV40.

Иначе говоря, на поздних этапах может осуществляться симметрическая транскрипция 14 — 20% каждого из четырех фрагментов генома. Сходная картина синтеза имеет место при транскрипции ранних и поздних нитей ДНК в литически зараженных клетках и ядрах инфицированных клеток, импульсно меченных in vitro (Ferdinand et al., 1977).

Эти данные свидетельствуют о том, что элонгация РНК мечеными нуклеотидами in vitro отражает ту частоту списывания, которая характерна для транскрипции L- и Е-нитей, инициируемых in vivo.

Так как РНК, синтезируемые транскрипционным комплексом и хроматином, количественно неотличимы, то, по-видимому, это исключает возможность того, что с интегрированных вирусных последовательностей может транскрибироваться какой-то определенный класс вирусной РНК.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Установлена прямая пропорциональность между дозой различных агентов (митомицин С, бромдезоксиуридин, УФ- и 60Со-γ-облучение) и урожаем вируса, освобожденного из трансформированных клеток (Kaplan et al., 1975). Урожай вируса увеличивается по сравнению с контролем в 1000 — 10 000 раз. В линиях — продуцентах инфекционного SV40 доля индуцированных клеток составляла 2 — 6% (по данным определения продукции V-антигена…

Метод искусственных гетерокарионов оказался весьма эффективен для многих тест-систем клеток, трансформированных как РНК-, так и ДНК-содержащими онковирусами. В некоторых случаях индикаторные культуры использовали даже для титрования освобожденного вируса по фокусам трансформации, которые он индуцировал (Svoboda et al., 1975). Во всех этих экс-периментах чем больше был процент гетерокарионов, тем выше оказалась эффективность метода. Однако в системах,…

В экспериментах, проведенных А. И. Агеенко и соавт. (1975), из перевивных сарком (с 50-й по 60-ю генерацию), индуцированных у хомяков аденовирусом 12-го типа, полный инфекционный вирус выделялся постоянно. Обнаружено, что при заражении центрифугатами разрушенных клеток перевивных сарком культуры почки эмбриона человека (ПЭЧ) в среднем через 5 дней отмечалось начало цитогенного действия вируса. Из первичноиндуцированных сарком…

Клетки, трансформированные всеми исследованными в настоящее время онкогенными ДНК-содержащими вирусами, в основном являются непермиссивными для полного репродуктивного цикла трансформирующего их вируса, и поэтому естественно, что полный инфекционный вирус ими не продуцируется. Как известно, существуют два крайних ответа пермиссивных клеток природного хозяина при взаимодействии с геномом ДНК-содержащих онковирусов — лизис и трансформация. Трансформация осуществляется тогда, когда…

Итак, по характеру взаимоотношений онковируса с трансформированной клеткой можно выделить следующие типы опухолевых клеток. Вируспродуцирующие клетки. Как правило, это относится к РНК-содержащим вирусам. Вирогенные клетки, в которых удается активировать вирусный геном с помощью различных методических приемов (трансплантации их естественным хозяевам онковируса или при использовании «контактной индукции», т. е. прямого контакта опухолевой клетки с чувствительной «индикаторной»…