18 апреля 2012

Размножение прокариотической ДНК

С помощью рекомбинантных молекул ДНК, полученных из мономерного сегмента ДНК мутанта SV40 с повторами, и специфического фрагмента ДНК (иммуногенная область) фага λ длиной 520 пар оснований продемонстрирована возможность размножения прокариотической ДНК в клетках почек обезьян.

Другой метод размножения и клонирования с использованием ДНК SV40 основан на способности векторов к экспрессии ранних и поздних генов при комплементации с ts-мутантными геномами помощниками. Фрагмент бактериальной ДНК в этих случаях вводили в уникальной ориентации между концами сегментов EcoRI и НраII в области делеции поздних генов SV40.

Таким способом удалось установить транскрипцию прокариотических последовательностей в клетках животных. Полученный гибридный геном успешно использовался для трансформации фибробластов эмбрионов крыс.

Анализ рекомбинаций между суперинфицирующим ts-мутантом SV40 (А- и D-классов) и персистирующим вирусным геномом в пермиссивных клетках, трансформированных SV40 и содержащих 1 — 2 копии вирусного генома в составе хромосомной ДНК, показал, что этот мутант приобретал фрагмент, который имеется в интегрированном геноме, но отсутствует в ts-мутанте. Yoshike и Defendi (1977) получены данные, позволяющие предполагать, что рекомбинации между клеточной и вирусной ДНК или частичная дупликация ДНК SV40 может происходить на многих участках хромосомы SV40. ДНК клеток, очевидно, может «добавляться» к ДНК SV40 в участке интеграции во время экспрессии (Yoshike, Defendi, 1977).

Итак, происхождение различных эволюционных типов Д-ДНК можно объяснить разными вариантами процесса «абортивной репликации», возникающего вследствие неполной или ошибочной репликации интегрированного или эписомального вирусного генома.

Более 80% дефектных молекул, несущих добавочные последовательности ДНК хозяина, короче нативных молекул ДНК вирусов SV40 и PY.

Такие Д-ДНК обладают резко сниженной способностью образовывать фокусы в клеточной культуре, однако они могут индуцировать синтез вирусспецифических белков и вызывать опухоли у хомяков, т. е. для проявления бластомогенной активности, как это показано, достаточно лишь части вирусного генома.

Вместе с тем выделены дефектные штаммы вирусов SV40 и PY из трансформированных ими клеток, которые образовали микробляшки в культуре, но не синтезировали Т- и V-антигенов вируса в пермиссивных клетках. Т-антиген появлялся в определенном числе клеток только после ряда субкультур (Huebner et al., 1975).

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Инактивированные ультрафиолетовым облучением вирусы герпеса 1-го и 2-го типов трансформируют клетки хомяков, крыс и мышей, которые при имплантации соответствующим животным вызывают у них метастазирующие опухоли. Однако, хотя у таких животных появляются вируснейтрализующие антитела, в опухолевой ткани вирусная ДНК, как правило, не определяется. В сыворотках крови животных с опухолями выявлен фактор, угнетающий цитотоксичность лимфоцитов по отношению…

При непермиссивных условиях (повышенная температура) интактный вирус HSV1 in vitro, по-видимому, трансформирует клетки легкого человека. Итак, HSV2 имеет четко выраженное сродство к генитальным органам и, вероятно, передается половым путем. Вместе с тем встречаются больные раком шейки матки, в организме которых антител к вирусу нет. HSV1 ассоциирован с кожей и слизистой губ и носоглотки. Оба вируса…

Из пяти групп известных в настоящее время ДНК-содержащих вирусов только одна группа Parvo (мелкие с однонитевой молекулой ДНК и кубическим типом симметрии) не имеет представителей в семействе онковирусов. Важно отметить, что число онкогенных типов в каждой из четырех групп возрастает по мере исследования их потенциальной трансформирующей способности In vivo и in vitro. Результаты сероэпидемиологических исследований…

Установлено, что продуктивная инфекция и трансформация клеток под действием ДНК-содержащих онковирусов обычно взаимоисключают друг друга: клетки природного хозяина главным образом продуктивно инфицируются (пермиссивные клетки), в то время как клетки другого вида чаще трансформируются (непермиссивные клетки). Однако не всегда пермиссивность обусловливается «природной» клеточной системой, иногда онковирусы могут обладать довольно широким спектром цитопатогенного действия на клетки других…

Вирус Эпштейна — Барр (ВЭБ) систематически продуцируется клетками африканской лимфомы Беркитта в культуре и обнаруживается при электронно-микроскопическом исследовании. В небольшом проценте случаев ВЭБ синтезируют клетки лимфобластоидных линий. В некоторых клеточных линиях и биопсийном материале из лимфом Беркитта вирионы ВЭБ не определяются. По-видимому, синтез полных вирусных частиц начинается после эксплантации клеток лимфомы в культуру, что сопровождается…