Размножение прокариотической ДНК
С помощью рекомбинантных молекул ДНК, полученных из мономерного сегмента ДНК мутанта SV40 с повторами, и специфического фрагмента ДНК (иммуногенная область) фага λ длиной 520 пар оснований продемонстрирована возможность размножения прокариотической ДНК в клетках почек обезьян.
Другой метод размножения и клонирования с использованием ДНК SV40 основан на способности векторов к экспрессии ранних и поздних генов при комплементации с ts-мутантными геномами помощниками. Фрагмент бактериальной ДНК в этих случаях вводили в уникальной ориентации между концами сегментов EcoRI и НраII в области делеции поздних генов SV40.
Таким способом удалось установить транскрипцию прокариотических последовательностей в клетках животных. Полученный гибридный геном успешно использовался для трансформации фибробластов эмбрионов крыс.
Анализ рекомбинаций между суперинфицирующим ts-мутантом SV40 (А- и D-классов) и персистирующим вирусным геномом в пермиссивных клетках, трансформированных SV40 и содержащих 1 — 2 копии вирусного генома в составе хромосомной ДНК, показал, что этот мутант приобретал фрагмент, который имеется в интегрированном геноме, но отсутствует в ts-мутанте. Yoshike и Defendi (1977) получены данные, позволяющие предполагать, что рекомбинации между клеточной и вирусной ДНК или частичная дупликация ДНК SV40 может происходить на многих участках хромосомы SV40. ДНК клеток, очевидно, может «добавляться» к ДНК SV40 в участке интеграции во время экспрессии (Yoshike, Defendi, 1977).
Итак, происхождение различных эволюционных типов Д-ДНК можно объяснить разными вариантами процесса «абортивной репликации», возникающего вследствие неполной или ошибочной репликации интегрированного или эписомального вирусного генома.
Более 80% дефектных молекул, несущих добавочные последовательности ДНК хозяина, короче нативных молекул ДНК вирусов SV40 и PY.
Такие Д-ДНК обладают резко сниженной способностью образовывать фокусы в клеточной культуре, однако они могут индуцировать синтез вирусспецифических белков и вызывать опухоли у хомяков, т. е. для проявления бластомогенной активности, как это показано, достаточно лишь части вирусного генома.
Вместе с тем выделены дефектные штаммы вирусов SV40 и PY из трансформированных ими клеток, которые образовали микробляшки в культуре, но не синтезировали Т- и V-антигенов вируса в пермиссивных клетках. Т-антиген появлялся в определенном числе клеток только после ряда субкультур (Huebner et al., 1975).
«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко
Вирус Эпштейна — Барр (ВЭБ) систематически продуцируется клетками африканской лимфомы Беркитта в культуре и обнаруживается при электронно-микроскопическом исследовании. В небольшом проценте случаев ВЭБ синтезируют клетки лимфобластоидных линий. В некоторых клеточных линиях и биопсийном материале из лимфом Беркитта вирионы ВЭБ не определяются. По-видимому, синтез полных вирусных частиц начинается после эксплантации клеток лимфомы в культуру, что сопровождается…
В лимфобластных клетках, несущих геном ВЭБ, синтезируется не менее 4 групп белков, ассоциированных с вирусом: Ядерный антиген (ЭBNA), по-видимому, аналогичен Т-антигену папова- и аденовирусов. Он обнаруживается с помощью РСК. Однако в отличие от Т-антигена папова- и аденовирусов ЭБНА прочно связан с хроматином и не отделяется от хромосом в процессе митоза (Luka et al., 1977). Химическая…
В обширных сероэпидемиологических исследованиях установлено, что высокие титры антител к ВЭБ чаще всего выявляются при двух злокачественных новообразованиях человека — лимфоме Беркитта и НФК, для которых характерно особое географическое распространение. Лимфома Беркитта встречается преимущественно в определенных районах экваториальной Африки и Новой Гвинеи, а карцинома носоглотки — наиболее частая злокачественная опухоль населения в некоторых областях Южного…
Вирус герпеса саймири выделен из почечной культуры здоровой беличьей обезьяны, а вирус герпеса ателес — от здоровых паукообразных обезьян. Для обоих вирусов фибробласты и эпителиальные клетки обезьян являются пермиссивной системой, в ней вирусы размножаются с цитопатогенным эффектом и могут быть получены в больших количествах. Оба вируса распространяются горизонтально и очень широко охватывают популяции природных хозяев,…
К этой группе относятся вирусы простого герпеса (Herpes simplex) 1-го и 2-го типов (HSV1 и HSV2) и вирусы цитомегалии, обладающие трансформирующей активностью in vitro. HSV1 и HSV2 индуцируют опухоли у хомяков при введении новорожденным животным. ДНК HSV (молекулярная масса 96Х106) состоит из областей, названных А, В, С, L и S, которые организованы в последовательности АВ…
