31 марта 2009

Йодирование с помощью хлорамина Т

С помощью хлорамина Т йодируют промежуточное соединениесложный эфир, образованный Nоксисукцинимидом и 3(роксифенил)пропионовой кислотой, которое затем конденсируется с аминогруппами полипептидного гормона. Такой подход позволяет избежать воздействия на гормон сильных окислителей или восстановителей. Эта методика несколько громоздка и пока не получила широкого распространения.

Участки, «узнающие» гормон, могут содержать разные аминокислотные области легких и тяжелых цепей иммуноглобулина. Легкие цепи ковалентно связаны с тяжелыми дисульфидными мостиками, обозначенными знаком S. Одна дисульфидная связь имеется и между двумя тяжелыми цепями. Недавно полученные данные указывают на Yобразную конфигурацию молекулы иммуноглобулина, в которой участки коплексирования с антигеном расположены в верхней части этой фигуры.

В настоящее время используют не Na131I, a Na125I, поскольку он обладает значительно большим периодом полураспада: 59 дней вместо 6. Однако при работе с 125I необходима особая тщательность, так как его удельная активность значительно ниже, чем у 131I.

Стероидные гормоны и витамин D метят тритием, что позволяет получить более высокую удельную активность, чем с помощью метки 14C. Полипептиды, не имеющие в своем составе остатков тирозина или гистидина, можно модифицировать, вводя или присоединяя тирозин к их структуре без видимого изменения конформации нативного соединения. Выбирают такие замещения, которые с наименьшей вероятностью изменят конформацию молекулы.

«Эндокринология и метаболизм», Ф.Фелиг, Д.Бакстер

Читайте далее:



Для чувствительных радиоиммунологических определений необходимо следующее: высокоочищенный гормон, несущий радиоактивную метку с достаточно высокой удельной активностью, чтобы в каждую пробирку можно было вносить только «следовые» его количества; реактивы, используемые в реакции присоединения метки, не должны изменять иммунореактивности гормона в существенной степени; антитела с достаточно высокой чувствительностью (сродством) и специфичностью, чтобы определить низкие физиологические уровни нужного…

В отдельных случаях концентрация рецепторов стероидных половых гормонов может определять успех определенных видов терапии. Так, вмешательства в деятельность эндокринной системы оказывают благоприятный эффект у женщин, больных раком молочной железы в пременопаузе, у которых раковая ткань содержит рецепторы эстрогенов. Такие вмешательства приносят успех у 50 — 70% женщин, у которых выявляется значительная концентрация рецепторов эстрогенов в…

В отношении взаимодействия антигена с антителами принимаются некоторые допущения: присутствующий гормон гомогенен и взаимодействует с антителами с равным сродством независимо от того, содержит он радиоактивную метку или нет; присутствующие антитела гомогенны и одна молекула антитела взаимодействует с одной молекулой гормона; два разных вида молекул — гормон и антитела — реагируют до тех пор, пока между…

После высвобождения из железы некоторые гормоны быстро распадаются и циркулируют в крови в виде фрагментов. Лучше всего это видно, вероятно, на примере ПТГ, который вскоре после выделения в кровь распадается на аминоконцевой и карбоксильноконцевой фрагменты. Последний фрагмент имеет гораздо более длительный период полужизни в крови, чем аминоконцевой. Однако биологической гормональной активностью обладает именно аминоконцевой фрагмент….

Наиболее широко применяемым методом йодирования белков является, вероятно, модифицированный метод, предложенный Greenwood, Hunter и Glover. В нем используется окисляющий агент хлорамин Т, превращающий Na125I в свободный йод, который затем включается главным образом в остатки тирозина. При использовании этого метода могут йодироваться и остатки гистидина. Для сохранения максимальной иммунореактивности необходимо, чтобы на молекулу гормона приходился только…