Йодирование
Наиболее широко применяемым методом йодирования белков является, вероятно, модифицированный метод, предложенный Greenwood, Hunter и Glover. В нем используется окисляющий агент хлорамин Т, превращающий Na125I в свободный йод, который затем включается главным образом в остатки тирозина.
При использовании этого метода могут йодироваться и остатки гистидина. Для сохранения максимальной иммунореактивности необходимо, чтобы на молекулу гормона приходился только один атом 131I или 125I, поскольку большая степень йодирования обычно снижает иммунологическую и биологическую активность гормона, изменяя его химические свойства.
В настоящее время применяют и другие способы йодирования. Второе по популярности место занимает, повидимому, ферментативный метод с использованием лактопероксидазы. В присутствии перекиси водорода, добавляемой непосредственно в реакционную смесь, лактопероксидаза превращает Na125I в свободный йод, который избирательно включается в остатки тирозина.
Поскольку перекись водорода является сильным окислителем, действие ее высоких концентраций на гормон может изменять его химические свойства; поэтому перекись водорода обычно добавляют двумя или тремя небольшими порциями, которые быстро используются в реакции.
Другим, более новым, но менее распространенным методом йодирования, является метод, разработанный Bolton и Hunter. В нем возможность вредных эффектов хлорамина Т, бисульфита натрия и перекиси водорода, применяемых в двух других методах йодирования, на гормон сводится к минимуму.
«Эндокринология и метаболизм», Ф.Фелиг, Д.Бакстер
Большинство методов in vivo требует относительно больших объемов плазмы, мочи или тканевых экстрактов, содержащих достаточное количество гормона, чтобы вызвать значимый биологический эффект. В связи с этим подобные исследования, хотя они очень важны для исходной характеристики различных гормональных препаратов, оказываются непригодными для рутинного клинического применения. За последние несколько лет разработаны различные методы биологического исследования in vitro….
Если в сыворотке больного присутствуют эндогенные антитела, то при определении, проводимом с помощью метода двойных антител, могут быть получены завышенные результаты. Теоретически меченый гормон, добавленный в пробирку для анализа, свяжется либо с антителами больного, содержащимися в пробе сыворотки, либо с антителами, вносимыми в пробирку. Будучи получены на глобулин животного, у которого вырабатывали первые антитела, вторые…
При биологических исследованиях in vitro могут использоваться различные показатели; к ним относятся изменения концентрации стероидов, ферментов или циклических нуклеотидов. Вообще говоря, определения in vitro более чувствительны, чем соответствующие им определения in vivo, и требуют значительно меньших объемов экстрактов сыворотки, ткани или мочи. Однако при интерпретации результатов биологического исследования in vitro необходима особая осторожность, поскольку в…
Стероидные гормоны обычно содержатся в сыворотке в связанном с различными белками виде. Поскольку сывороточные белки могут обладать сродством к гормону, сходным со сродством антител, используемых в радиоиммунологическом анализе, то чтобы последний дал надежные результаты, гормоны нужно сначала экстрагировать, т. е. отделить от сывороточных белков. До широкого распространения радиоиммунологических методов кортизол и другие сходные стероиды, которые…
После лишения молекулы ХГЧ сиаловой кислоты (десиалилация) in vitro гормон оказывает такой же, если не больший, биологический эффект, что и его нативная, полностью сиалилированная молекула. С другой стороны, in vivo он проявляет очень небольшую биологическую активность, отражающую степень десиалилации его молекулы. Это расхождение определяется значительно более коротким периодом полужизни десиалилированного ХГЧ в плазме по сравнению…
