31 марта 2009

Использование гипофизэктомированных животных

Гипофизэктомированных животных используют для того, чтобы исключить синтез и секрецию тестостерона в ответ на эндогенный Л Г. Этот метод является одним из классических и все еще применяется для характеристики препаратов ЛГ и ХГЧ. Он был впервые предложен более 40 лет назад Greep и соавт., а впоследствии модифицированы.

Поскольку наклоны кривой дозареакция от одного биологического определения к другому могут значительно варьировать даже при использовании одного и того же препарата, то каждый раз при определении необходимо производить статистический анализ на параллелизм между наклонами и однородностью отклонений кривых доза—реакция для стандарта или препарата сравнения и неизвестного препарата. В идеальном случае следует определить эффект не менее, чем в 3 достаточно отдаленных друг от друга точках кривой доза—реакция с использованием проб от 3 — 5 животных на каждую точку для стандартного и неизвестного препарата.

Только при параллелизме и гомогенности отклонений между стандартом и испытуемым препаратом можно сделать достоверный вывод о биологической активности и ее доверительных границах применительно к испытуемому препарату. При отсутствии такого параллелизма об активности испытуемого препарата судить нельзя. Легко убедиться, что при биологических исследованиях любого типа не должно определяться действие в одной точке.

За многие годы предложено огромное число методов биологического тестирования in vivo. Некоторые из них достаточно грубы, нечувствительны и неспецифичны, например инсулиновые судороги у мышей. Другие биологические методы значительно более специфичны и чувствительны и продолжают применяться для характеристики очищенных гормональных препаратов.

«Эндокринология и метаболизм», Ф.Фелиг, Д.Бакстер

Читайте далее:



В отношении взаимодействия антигена с антителами принимаются некоторые допущения: присутствующий гормон гомогенен и взаимодействует с антителами с равным сродством независимо от того, содержит он радиоактивную метку или нет; присутствующие антитела гомогенны и одна молекула антитела взаимодействует с одной молекулой гормона; два разных вида молекул — гормон и антитела — реагируют до тех пор, пока между…

В отдельных случаях концентрация рецепторов стероидных половых гормонов может определять успех определенных видов терапии. Так, вмешательства в деятельность эндокринной системы оказывают благоприятный эффект у женщин, больных раком молочной железы в пременопаузе, у которых раковая ткань содержит рецепторы эстрогенов. Такие вмешательства приносят успех у 50 — 70% женщин, у которых выявляется значительная концентрация рецепторов эстрогенов в…

Наиболее широко применяемым методом йодирования белков является, вероятно, модифицированный метод, предложенный Greenwood, Hunter и Glover. В нем используется окисляющий агент хлорамин Т, превращающий Na125I в свободный йод, который затем включается главным образом в остатки тирозина. При использовании этого метода могут йодироваться и остатки гистидина. Для сохранения максимальной иммунореактивности необходимо, чтобы на молекулу гормона приходился только…

После высвобождения из железы некоторые гормоны быстро распадаются и циркулируют в крови в виде фрагментов. Лучше всего это видно, вероятно, на примере ПТГ, который вскоре после выделения в кровь распадается на аминоконцевой и карбоксильноконцевой фрагменты. Последний фрагмент имеет гораздо более длительный период полужизни в крови, чем аминоконцевой. Однако биологической гормональной активностью обладает именно аминоконцевой фрагмент….

С помощью хлорамина Т йодируют промежуточное соединениесложный эфир, образованный Nоксисукцинимидом и 3(роксифенил)пропионовой кислотой, которое затем конденсируется с аминогруппами полипептидного гормона. Такой подход позволяет избежать воздействия на гормон сильных окислителей или восстановителей. Эта методика несколько громоздка и пока не получила широкого распространения. Участки, «узнающие» гормон, могут содержать разные аминокислотные области легких и тяжелых цепей иммуноглобулина. Легкие…