Метод определения хагеманзависимого фибринолиза (К. Н. Веремеенко и сотр., 1979)

Принцип метода основан на способности каолина активировать фактор Хагемана и таким образом значительно стимулировать внутренний путь активации фибринолиза.

В центрифужную пробирку наливают 9,5 мл. дистиллированной воды, добавляют 0,5 мл 1% раствора уксусной кислоты, 0,5 мл плазмы и 0,3 взвеси каолина (5 мг каолина на 1 мл дистиллированной воды). Смесь ставят на водяную баню при 37° С на 30 мин, а затем центрифугируют 3 мин при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость осторожно сливают, а пробирку высушивают, переворачивая вверх дном на обеззоленный фильтр. Затем разводят осадок боратом, тщательно размешивают стеклянной палочкой, помещают пробирку на водяную баню при 37° С и добавляют 0,2 мл 0,277% раствора хлорида кальция. Засекают момент образования сгустка и включают секундомер. Через 5 мин и далее через каждую минуту проверяют, произошло ли растворение сгустка. В норме лизис сгустка соответствует 15—20 мин.

Удлинение времени растворения эуглобулинов при активации фибринолиза каолином свидетельствует главным образом об истощении калликреина и. высокомолекулярного кининогена, что отмечается при ТГС и тромбозах. Кроме того, удлинение хагеманзависимого фибринолиза наблюдается при увеличении концентрации антиплазминов. Ускорение времени хагеманзависимого фибринолиза наблюдается при его выраженной активации.

Метод определения эуглобулинового фибринолиза, активированного стрептокиназой (3. С. Баркаган и сотр., 1982; Б. И. Кузник и сотр., 1982)

Цитратную плазму получаем как обычно (см. эуглобулиновый метод определения фибринолитической активности крови). В пробирку вносим 9,5 мл дистиллированной воды, 0,14 мл 1% уксусной кислоты и 0,5 мл плазмы, после чего смесь помещаем в холодильник на 30 мин при +4° С. По прошествии указанного срока эуглобулины выпадают в осадок. Для их осаждения смесь центрифугируют 3 мин при 1000 об/мин, надосадочную жидкость сливают, а пробирку высушивают, как это указано в предыдущем методе. Осадок эуглобулинов растворяют в 0,5 мл бората (0,1% раствор) и вносят 0,05 мл стрептокиназы, разведенной таким образом, чтобы на эуглобулинах пулированной плазмы время растворения сгустка равнялось 8—10 мин.

Помещают пробирку на водяную баню и добавляют 0,2 мл 0,277% раствора СаСl₂. После образования плотного сгустка тщательно следят за временем его растворения.

В норме фибринолиз, индуцированный стрептокиназой, должен осуществляться за 8—10 мин. Удлинение этого времени свидетельствует, как правило, об истощении плазминогена, что наблюдается при ТГС и тромбозах.

Очень редко удлинение фибринолиза, индуцированного стрептокиназой, зависит от повышения концентрации ингибиторов фибринолиза (при применении с терапевтической целью контрикала, гордокса и других антипротеаз).

Одновременное определение тотального эуглобулинового, хагеманзависимого фибринолиза и фибринолиза, индуцированного стрептокиназой, дает яркое представление о содержании калликреина, ВМК, плазминогена и ингибиторах фибринолиза (плазмина).

«Кровотечения и тромбозы при оториноларингологических заболеваниях»,
Г.А.Фейгин, Б.И.Кузник