Определение количества тромбоцитов (Brecher et al., 1953)

В камере Горяева проводят прямой подсчет тромбоцитов, используя в качестве разводящей жидкости 1% раствор оксалата аммония, который гемолизирует эритроциты.

Исследования можно проводить в капиллярной или венозной крови. Кровь набирают до метки 01 в смеситель для эритроцитов и разводят оксалатом аммония до метки 101, после чего содержимое перемешивают в течение 3 мин. За этот срок эритроциты гемолизируются. Заполняют камеру Горяева и на 20 мин ставят ее во влажную камеру (чашку Петри, в которую помещена ваточка, смоченная физиологическим раствором). Тромбоциты подсчитывают в 25 больших квадратах.

Для определения числа тромбоцитов используют фазовоконтрастную приставку. При отсутствии последней можно обойтись и без нее, однако для этого необходим навык подсчета тромбоцитов.

Для расчета количества тромбоцитов в 1 мкл полученную величину умножают на 1000, для расчета в 1 л найденное число тромбоцитов умножают на 109.

Определять число тромбоцитов можно и по методу И. И. Данилина и В. Л. Крыжановского (1967). Принцип и техника выполнения та же, но в качестве разводящей жидкости используется Дитратно-фурацилиновый раствор, который приготовляется следующим образом: 3,5 г основного лимоннокислого натрия смешивают с 0,025 мл фурацилина и добавляют до 100 мл дистиллированную воду. Раствор кипятят, охлаждают и фильтруют. Хранить раствор следует в холодильнике.

При заборе крови в смеситель ее следует разводить в 200 раз (кровь набирают до метки 0,5, разводящую жидкость — до метки 101). Для подсчета числа тромбоцитов в 1 мкл полученную цифру следует умножить на 200. Достоинство метода заключается в том, что не требуется фазовоконтрастная приставка.

Гемолизат-агрегационный тест (Л. 3. Баркаган и соавт., 1986)

Гемолизат-агрегационный тест позволяет за короткий промежуток времени определить видимую глазом в проходящем свете агрегацию тромбоцитов. Методика его проведения заключается в следующем. В силиконированную центрифужную пробирку наливают 0,1 мл 3,8% цитрата натрия.

Без наложения жгута или путем легкого пережатия вены короткой иглой с широким просветом набирают кровь до метки 1 мл. Аккуратно покачивая, перемешивают кровь со стабилизатором. Путем центрифугирования при 1000 об/мин в течение 5 мин получают богатую тромбоцитами плазму и разливают ее по 0,2 мл в две пробирки.

Оставшиеся эритроциты трижды промывают физиологическим раствором и трижды центрифугируют (1500 об) в течение 10 мин. Таким образом получают взвесь красных кровяных телец. В дальнейшем 0,1 мл эритроцитов переносят в отдельную пробирку и гемолизируют 1,0 мл дистиллированной воды. Это разведение является основным (маточным) и обозначается как 10^-1.

Далее из него в 5 пробирках готовят последовательные разведения гемолизата, для чего 0,1 мл каждого предыдущего разведения вносят в пробирку, содержащую 1,0 мл дистиллированной воды. Рабочими являются разведения 10^-2 и 10^-6 (1-я и 5-я после маточного раствора пробирки), что соответствует концентрациям 10⁷ и 10³ гемолизированных эритроцитов. Разведение 10^-2 обозначается как максимальная, а 10^-6 — как субпороговая доза.

«Кровотечения и тромбозы при оториноларингологических заболеваниях»,
Г.А.Фейгин, Б.И.Кузник