Протаминсульфатный тест (Lipinski et al., 1967)
При наличии в плазме заблокированных фибринмономерных комплексов добавление протаминсульфата приводит к образованию в ней сгустка.
Забор крови производится так же, как и при постановке этанолового теста. Разница лишь заключается в том, что после получения плазмы, богатой тромбоцитами, ее дополнительно центрифугируют при 4000 об/мин в течение 20 мин.
К 0,4 мл плазмы, бедной тромбоцитами, в условиях силиконирования и охлаждения добавляют 0,1 мл 1% раствора протамин-сульфата. Немедленно включают секундомер, содержимое пробирки перемешивают и ставят на водяную баню. Результаты определяют через 15 и 30 мин.
Тест считается положительным, если образуется либо гомогенный сгусток, либо несколько разорванных сгустков.
Протаминсульфатный тест часто (хотя несколько реже, чем этаноловый) бывает положительным при ТГС.
Следует заметить, что эти тесты надо ставить одновременно» так как они дополняют друг друга.
В зависимости от характера реакции (хлопья, нити, сгусток) можно рассчитать концентрацию (приблизительную) продуктов деградации фибриногена и фибрина (Д. М. Зубаиров и сотр. 1983).
Количественный метод определения фибриногена В (В. Г. Патеюк, 1978)
Принцип метода основан на способности фибриногена В (комплекс полных и неполных фибринмономеров, соединенных с ранними и поздними ПДФ) выпадать в осадок под влиянием спиртового раствора бетанафтола.
В пробирку вносят 0,5 мл 1,34% оксалата натрия и из вены без жгута или при очень легком ее пережатии толстой короткой иглой забирают кровь (4,5 мл), которую центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин. Плазму отсасывают и вносят по 1 мл в 2 пробирки. Затем в 1 пробирку наливают 0,2 мл 50% раствора спирта, в другую — такое же количество 2% раствора бетанафтола, разведенного на 50% спирте (концентрация спирта обязательно контролируется спиртометром).
Обе пробирки оставляют при комнатной температуре на 10 мин. Появление хлопьев во второй пробирке свидетельствует о наличии фибриногена В. По интенсивности выпадения хлопьев оценивается качественная реакция (от 1 + до 4+). После этого пробирки слегка встряхивают и их содержимое фильтруют через заранее взвешенные обеззоленные фильтры, которые высушивают в термостате до постоянного веса. Разница между весом 1-го фильтра до и после фильтрования и высушивания содержимого 1-й пробирки свидетельствует о наличии свернувшихся белков под влиянием спирта и в расчет не принимается. Обычно эта величина невелика. Разница между весом 1-го и 2-го фильтра после высушивания свидетельствует о наличии фибриногена В.
Фибриноген В в норме всегда отсутствует. Наличие его свидетельствует о развитии ТГС.
Определение ранних нитей фибрина (А. Д. Планова, 1971)
При деструкции тканей в цельной крови выявляются ранние нити фибрина, которые в последующем растворяются. Согласно нашим данным, появление ранних нитей фибрина свидетельствует о наличии ТГС.
Первые капли крови, вытекающие из вены, не исследуют, а последующие набирают на часовое стекло. Наблюдение ведется при комнатной температуре в проходящем свете.
Сразу же вдоль капли проводят стеклянным крючочком с загнутым концом, отмечают время появления и исчезновения ранних нитей фибрина, а также образования окончательного фибринового сгустка.
У больных с выраженным ТГС ранние нити фибрина появляются через 20—40 с после взятия крови. У здоровых людей ранние нити фибрина не появляются.
«Кровотечения и тромбозы при оториноларингологических заболеваниях»,
Г.А.Фейгин, Б.И.Кузник
Интервал времени от поступления первой порции крови в первую пробирку до конца свертывания крови во второй пробирке регистрируют как скорость свертывания крови. При этом можно внести поправку на время, которое потребовалось для заполнения кровью первой пробирки. Двухпробирочный тест производят лишь для того, чтобы исключить влияние турбулентного движения крови. Пример. Во вторую пробирку кровь начала поступать…
Среди методов, позволяющих выявить нарушения в коагуляционном гемостазе, мы считаем целесообразным определять время свертывания (Lee, White, 1913), каолиновое (Harttersley, 1966), кефалин-каолиновое (Caen et al., 1968), протромбиновое (Quick, 1966) и тромбиновое время (Biggs, Мс Farlane, 1962), концентрацию фибриногена (Р. А. Рутберг, 1961; М. С. Мачабели, 1962) и гепарина (Rabli, 1970), активность антитромбина-III (Henson, Loeliger, 1963; К….
В камере Горяева проводят прямой подсчет тромбоцитов, используя в качестве разводящей жидкости 1% раствор оксалата аммония, который гемолизирует эритроциты. Исследования можно проводить в капиллярной или венозной крови. Кровь набирают до метки 01 в смеситель для эритроцитов и разводят оксалатом аммония до метки 101, после чего содержимое перемешивают в течение 3 мин. За этот срок эритроциты…
Пробирку с 0,2 мл плазмы и с одним из разведений гемолизата прогревают на водяной бане при 37° С в течение 1 мин, а затем 0,05 мл гемолизата добавляют в плазму и включают секундомер. В проходящем свете при постоянном покачивании пробирки отмечают появление видимых агрегатов тромбоцитов («малые крошки») и останавливают секундомер. Сначала проводят исследования с разведением…
«Тест-тромбин» содержит 50 ед тромбина. Перед употреблением в ампулу, содержащую сухой тромбин, добавляют 1 мл 0,9% раствора хлорида натрия, взбалтывают и 0,2 мл переносят в отдельную пробирку, в которую добавляют 0,5 мл крови или нитратной плазмы. Образование сгустка в норме происходит за 5—11 с, что соответствует концентрации фибриногена 2—4 г/л. Замедление времени свертывания до 60…
