13 января 2012

Гемолизат-агрегационный тест (добавление гемолизата в плазму)

Пробирку с 0,2 мл плазмы и с одним из разведений гемолизата прогревают на водяной бане при 37° С в течение 1 мин, а затем 0,05 мл гемолизата добавляют в плазму и включают секундомер. В проходящем свете при постоянном покачивании пробирки отмечают появление видимых агрегатов тромбоцитов («малые крошки») и останавливают секундомер. Сначала проводят исследования с разведением гемолизата 10-2, а затем 10-6 степени.

Показания теста выражают в секундах времени агрегации (ВА). Затем по полученным данным определяют индекс активации тромбоцитов (ИАТ), используя формулу ИАТ=С/М, где ИАТ — индекс активации тромбоцитов, С и М — количество тромбоцитов, определяемое по таблице (см.: Лаб. дело. 1986. № 3. С. 139) и соответствующее полученному времени агрегации на каждую из концентраций гемолизата.

Для экспресс-диагностики готовят основное разведение (10-1) гемолизата донорских эритроцитов в нескольких пробирках. Гемолизат замораживают и хранят в таком виде не более 1 месяца. По мере необходимости основное разведение гемолизата размораживают и готовят из него рабочие разведения. Гемолизат повторному замораживанию не подлежит.

В норме время агрегаций с разведением гемолизата 10-2 колеблется от 11 до 17 с, а при разведении 10-6 — 40—54 с. Индекс ИАТ варьирует в пределах 0,82—1,17.

Гиперагрегация тромбоцитов как при максимальных, так и субпороговых дозах гемолизата может быть при тромбозах и тромботических состояниях, а также в первую (гиперкоагуляционную) фазу ТГС. Повышенная чувствительность тромбоцитов к субпороговым дозам гемолизата свидетельствует о циркуляции в кровотоке активированных тромбоцитов, обладающих усиленной готовностью к агрегации. В таких случаях ИАТ значительно повышен. Удлинение ВА преимущественно при субпороговых дозах гемолизата характерно для нарушения «реакции высвобождения» тромбоцитов, что нередко наблюдается при лечении дезагрегантами.

Ослабление агрегации на максимальные дозы гемолизата при повышенной чувствительности пластинок к субпороговой концентрации обычно регистрируется у больных с ТГС в гипокоагулогическую фазу.

Определение времени свертывания крови (Lee, White, 1913)

Определяется скорость образования сгустка венозной крови при 37° С.

Две чистые и обязательно сухие пробирки одинакового размера устанавливают на водяную баню при температуре 37° С. Проводят венепункцию и при появлении первой капли крови включают секундомер. Пункцию вены обязательно проводят сухой толстой иглой.

Набирают в первую пробирку 1 мл крови, а затем такое же количество крови во вторую пробирку. По секундомеру засекают время, ушедшее на заполнение первой пробирки. Обе пробирки вновь помещают на водяную баню. Первую пробирку наклоняют на 60—70° каждые 30 с до того момента, пока не образуется плотный сгусток (кровь перестанет растекаться по стеклу).

Отмечают время свертывания крови в первой пробирке и лишь после этого через каждые 30 с наклоняют вторую пробирку. Отмечают время образования сгустка крови во второй пробирке.


«Кровотечения и тромбозы при оториноларингологических заболеваниях»,
Г.А.Фейгин, Б.И.Кузник



Интервал времени от поступления первой порции крови в первую пробирку до конца свертывания крови во второй пробирке регистрируют как скорость свертывания крови. При этом можно внести поправку на время, которое потребовалось для заполнения кровью первой пробирки. Двухпробирочный тест производят лишь для того, чтобы исключить влияние турбулентного движения крови. Пример. Во вторую пробирку кровь начала поступать…

Среди методов, позволяющих выявить нарушения в коагуляционном гемостазе, мы считаем целесообразным определять время свертывания (Lee, White, 1913), каолиновое (Harttersley, 1966), кефалин-каолиновое (Caen et al., 1968), протромбиновое (Quick, 1966) и тромбиновое время (Biggs, Мс Farlane, 1962), концентрацию фибриногена (Р. А. Рутберг, 1961; М. С. Мачабели, 1962) и гепарина (Rabli, 1970), активность антитромбина-III (Henson, Loeliger, 1963; К….

В камере Горяева проводят прямой подсчет тромбоцитов, используя в качестве разводящей жидкости 1% раствор оксалата аммония, который гемолизирует эритроциты. Исследования можно проводить в капиллярной или венозной крови. Кровь набирают до метки 01 в смеситель для эритроцитов и разводят оксалатом аммония до метки 101, после чего содержимое перемешивают в течение 3 мин. За этот срок эритроциты…

«Тест-тромбин» содержит 50 ед тромбина. Перед употреблением в ампулу, содержащую сухой тромбин, добавляют 1 мл 0,9% раствора хлорида натрия, взбалтывают и 0,2 мл переносят в отдельную пробирку, в которую добавляют 0,5 мл крови или нитратной плазмы. Образование сгустка в норме происходит за 5—11 с, что соответствует концентрации фибриногена 2—4 г/л. Замедление времени свертывания до 60…

При наличии в плазме заблокированных фибринмономерных комплексов добавление протаминсульфата приводит к образованию в ней сгустка. Забор крови производится так же, как и при постановке этанолового теста. Разница лишь заключается в том, что после получения плазмы, богатой тромбоцитами, ее дополнительно центрифугируют при 4000 об/мин в течение 20 мин. К 0,4 мл плазмы, бедной тромбоцитами, в условиях…