Содержание антибиотика в 1 мл испытуемого материала
Разность между найденными средними величинами зон испытуемого образца и контрольной концентрации прибавляют к величине зоны контрольной концентрации на стандартной кривой. Затем по кривой находят концентрацию, соответствующую найденной величине зоны в ЕД/мл. Умножая полученную концентрацию на степень разведения испытуемого материала, определяют содержание антибиотика в 1 мл испытуемого материала. Точность метода составляет +10%.
Для определения концентрации в испытуемом растворе можно использовать таблицы расчета активности антибиотика ВНИИА. Эти таблицы содержат числовые изображения кривых, имеющих различные углы наклона. Таблицы используют в сочетании со стандартной кривой. Угол наклона каждой кривой характеризуется разностью диаметров зон двукратных концентраций на стандартной кривой. Условно принимают, что антибиотик в концентрации 1 ЕД/мл образует зону задержки роста диаметром 17 мм. Чтобы найти таблицу, которая соответствует углу наклона кривой, находят на кривой разность диаметров зон двух концентраций, отличающихся друг от друга в 2 раза. Для определения концентрации испытуемого раствора разность между средними диаметрами зон исследуемого и стандартного препарата прибавляют к 17 мм, если она положительная, и вычитают из 17 мм, если она отрицательная. По полученной величине диаметра зон находят соответствующую концентрацию в таблице. Найденную величину умножают на количество единиц, содержащихся в 1 мл контрольной концентрации стандарта.
Умножением этой величины на степень разведения находят содержание антибиотика в 1 мл испытуемого раствора (Государственная фармакопея СССР, изд. X).
Антибиотик может содержаться в тканях и жидкостях больного в малых количествах, не обнаруживаемых обычными методами. Повышения чувствительности метода можно достичь подбором более чувствительного тест-микроба, уменьшением количества посевного материала, вносимого в питательный агар, уменьшением толщины слоя агара, понижением температуры выращивания для замедления роста тест-микроба во время диффузии антибиотика, изменением концентрации буфера.
Разработаны методы определения концентрации антибиотиков в сыворотке крови при введении комбинированных препаратов (олететрин, ампиокс — комбинация ампициллина с оксациллином и др.), основанные на использовании двух микроорганизмов с различной степенью чувствительности к компонентам, входящим в состав сочетания, или на инактивации одного из препаратов (например, ампициллина пенициллиназой в ампиоксе) ферментами.
При определении активности антибиотиков методом диффузии в агар ответ получают через 16—18 ч. Существуют ускоренные методы определения, с помощью которых результаты можно установить уже через 3—5 ч. Ускорение опыта достигается путем увеличения посевной дозы тест-культуры на 1 мл питательной среды, повышением температуры инкубации до 38—45° или проявлением плохо видимых зон и слабо выраженных микробных газонов через 3—5 ч инкубации химическими методами. В последнем случае поверхность питательной среды обрабатывают 2% раствором красной кровяной соли и 1% раствором железо-аммиачных квасцов. Микробный газон при этом окрашивается в темно-синий цвет, на фоне которого четко вырисовываются светлые зоны подавления роста.
«Справочник по антибиотикам», С.М.Навашин, И.П.Фомина