Изоформы и общая активность гексокиназы в цитоплазме интактных клеток ФЭК при культивировании - Молекулярные механизмы перестройки функционирования клеточного генома при трансформации - Механизмы вирусного онкогенеза - Библиотека доктора - Медкурсор - актуальная медицина
2 августа 2012

Изоформы и общая активность гексокиназы в цитоплазме интактных клеток ФЭК при культивировании

Установлено, что изоформы всех исследованных ферментов и общая активность гексокиназы в цитоплазме интактных клеток ФЭК при культивировании до 24-го дня не изменялись. В ядерной фракции активность гексокиназы 3 была увеличена в течение всех сроков наблюдения, повышена активность ЛДГ1 на 5-й и 24-й дни, а также ЛДГЗ и МДГ1 во все исследованные периоды.

Обнаруженные изменения в интактных клетках, вероятно, связаны с их ростом in vitro.

Изучение этих же ферментов в разных фазах роста нормальной культуры ФЭК показало, что общая активность гексокиназы и ее изоферментов, а также изоферментов ЛДГ в ядре и цитоплазме не изменялась в логарифмической и стационарной фазах. Выявлены изменения активности изоферментов только МДГ. Так, в ядре была увеличена активность МДГ1, в цитоплазме — МДГ2 в поздней стационарной фазе.

Действие инфекционного вируса А6 на культуру ФЭК не вызывало изменений гексокиназы. Изменения изоферментного спектра ЛДГ при внедрении вируса в клетку выражались в подавлении активности ЛДГ1 в ядре, которая в норме была повышена. В цитоплазме культуры исчезала быстро мигрирующая ЛДГ5, активность ЛДГ2 и ЛДГЗ была повышена в 1-й и 3-й дни по сравнению с нормой.

На 18-й день резко снизилась активность ЛДГЗ. На 24-й день инфекции уменьшилась активность ЛДП и увеличилась ЛДГ2, 3 и 4.

Аденовирус 6-го типа способствовал возрастанию активности МДГЗ в ядре и в цитоплазме на 3-й день взаимодействия с вирусом и подавлению МДП, которая была повышена в норме. Следовательно, при действии инфекционного вируса на культуру ФЭК наибольшие сдвиги наблюдались в изоферментном спектре ЛДГ (смотрите рисунки ниже).


Активность ГК

Активность ГК

В растворимой фракции ядер (а) и цитоплазмы (б) клеток интактной культуры ФЭК (1) и после заражения инфекционным А6 (2) и онкогенным А12 (3) аденовирусами человека. По оси абсцисс — время после заражения вирусом; по оси ординат — активность фермента (мкмоль глюкозы на 1 г белка за 1 мин Х10-2).


Изоферменты ЛДГ (1 — 5) в цитоплазме клеток культуры ФЭК в норме (а)
и при заражении инфекционным аденовирусом человека 6-го типа (б)

Изоферменты ЛДГ (1 — 5) в цитоплазме клеток культуры ФЭК в норме (а) и при заражении инфекционным аденовирусом человека 6-го типа (б)

По оси абсцисс — время культивирования.


Изоферменты ЛДГ (а) и МДГ (б) в растворимой ядерной фракции
в культуре ФЭК в норме (в) и при заражении вирусом А6

12

По оси абсцисс — время после инфицирования.


Изоферменты МДГ (1 — 3) в цитоплазме клеток культуры ФЭК в норме (а) и при заражении вирусом А6 (б)

Изоферменты МДГ (1 — 3) в цитоплазме клеток культуры ФЭК в норме (а) и при заражении вирусом А6 (б)


Обнаружено, что в ядерной фракции и в цитоплазме культуры ФЭК, зараженной онкогенным вирусом А12, происходят существенные сдвиги общей активности гексокиназы. Так, в ядерной фракции этот показатель начал изменяться уже на 3-й день контакта вируса А12, с клеткой и резко повысился на 18-й день в ядре — в 2 раза выше нормы (как и в ФЭК, инфицированных аденовирусом 6-го типа).

На 24-й день заражения активность гексокиназы в ядре увеличилась по сравнению с нормой в 31/2 раза (Р<0,1) и в 3,3 раза (Р<, 0,1), чем в ФЭК, зараженных вирусом Аб.

Смотрите рисунок — Активность ГК


 Активность ПК

Активность ПК

В ядре (1 — 3) и цитоплазме (4 — 6) интактной культуры (1, 4) и при заражении инфекционным А6 (2, 5) и онкогенным А12 (3, 6) аденовирусами.
По оси ординат — активность мкмоль глюкозы на 1 г белка за 1 минХ10-2.


В цитоплазме клеток культуры ФЭК общая активность гексокиназы начала повышаться на 5-й день заражения (в 2,6 раза по сравнению с нормой и в 2,2 раза по сравнению с ФЭК, зараженной А6). Этот показатель резко увеличился на 18-й день (в 6,6 раза по сравнению с нормой и в 5,8 раза по сравнению с ФЭК, инфицированной вирусом А6).

На 24-й день заражения онковирусом А12 активность гексокиназы в цитоплазме была почти в 14 раз выше, чем в норме, и в 12 раз выше, чем в ФЭК, зараженной А6.

Смотрите рисунок — Активность ГК

Смотрите рисунок — Активность ПК

Эти данные подтверждают предположение об увеличении потенциальной способности к гликолизу, связанной с малигнизацией клеток (В. С. Шапот, 1975). Отмечено повышение общей активности фермента в цитоплазме по сравнению с активностью в ядерной фракции из клеток культуры, зараженной онковирусом.

В ядерной фракции клеток культуры ФЭК на 5-й, 8-й и 18-й дни после внесения в нее вируса А12 исчезала гексокиназа 1. На 24-й день активность этого изофермента была увеличена в 6 раз по сравнению с нормой. Постепенно повышалась активность и гексокиназы 2, а активность гексокиназы 3 увеличивалась на 8-й и 18-й дни и резко возрастала на 24-й день инфекции.


 Электрофореграммы и денситограммы изоферментов ГК (1 — 3) в глобулиновой фракции ядер клеток культуры ФЭК

Электрофореграммы и денситограммы изоферментов ГК (1 — 3) в глобулиновой фракции ядер клеток культуры ФЭК

а — контроль; б, в, г — после инфицирования аденовирусом 12-го типа на 8-й, 18-й и 24-й дни.


В ядерной фракции достоверно повышалась активность ЛДГ1 на 5-й и 18-й дни инфекции, а ЛДГ2 на 8-й и 18-й дни.


Электрофореграммы и денситограммы ферментов ЛДГ
и МДГ в глобулиновой фракция ядер клеток культуры ФЭК

Электрофореграммы и денситограммы ферментов ЛДГ и МДГ в глобулиновой фракция ядер клеток культуры ФЭК

1,5 — контроль; 2 — 4 — изоферменты ЛДГ после заражения вирусом А12 на 5-й, 18-й и 23-й дни;
6 — 10 — изоферменты МДГ после заражения вирусом А12 на 3-й, 5-й, 8-й, 18-й, и 24-й дни.


Динамика изменения активности изоферментов ЛДГ (1 — 6)
и МД1 (4 — 6) в глобулиновой ядерной фракции клеток культуры ФЭК

Динамика изменения активности изоферментов ЛДГ (1 — 6) и МД1 (4 — 6) в глобулиновой ядерной фракции клеток культуры ФЭК

а — контроль, б — опыт.
По оси ординат — активность (мкмоль глюкозы на 1 г белка за 1 минХ10-2).


Изменения динамики электроподвижности ОЭП изоферментов ЛДГ (1-3)
и МДГ (4-6) в глобулиновой фракции ядер клеток культуры ФЭК

Изменения динамики электроподвижности ОЭП изоферментов ЛДГ (1-3) и МДГ (4-6) в глобулиновой фракции ядер клеток культуры ФЭК

а — контроль; б — опыт.
На 24-й день последний показатель был несколько меньше, чем в норме.



«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Результаты, полученные при количественном исследовании тонкого строения клеток ФЭХ

Анализируя результаты, полученные при количественном исследовании тонкого строения клеток ФЭХ при действии вируса А12, можно отметить, что показатель Кэ, характеризующий степень развития эргастоплазмы, значительно снижается, особенно начиная с 7-го дня после инфицирования, и к сроку выраженной трансформации достигает предельно низких величин. Динамика изменения показателя Кэ в процессе трансформации культуры ФЭХ вирусами А12 и RSV 1…

Особое значение для оценки сдвигов, происходящих в энергетическом обмене на ранних этапах трансформации, детерминированной онковирусом, приобретает анализ структурной перестройки митохондрий, осуществляемый параллельно с определением функциональных изменений, полученных на этой же системе и в те же сроки с помощью биохимических методов. Сведения о подобных исследованиях в литературе отсутствуют. А. И. Агеенко, А. С. Ягубов и Ю….

К принципиально важным вопросам онкоморфологии относятся выявление и определение сходства и отличий нормальных и опухолевых клеток. Это стало возможным только в последние годы благодаря количественной электронной микроскопии, основанной на морфометрическом анализе электронно-микроскопических картин с использованием методов планиметрии и принципов стереологии (Г. Г. Автандилов, 1973). Установлено, что эргастоплазма и полирибосомный аппарат являются основными цитоплазматическими органеллами белкового…

Преобладание медленно движущихся (катодных) фракций ЛДГ4 и ЛДГ5 при снижении уровня быстро движущихся (анодных) ЛДГ1 и ЛДГ2 обнаружено в тканях, адаптированных к гипоксии и ацидозу, в которых основным источником энергии является гликолиз. В то же время можно считать доказанным, что удельный вес гликолиза в клетках злокачественных новообразований повышается (В. С. Шапот, 1975). Установлено, что скорость…

Показано, что повышение процента ЛДГ4 и ЛДГ5, а также снижение содержания ЛДГ1 и ЛДГ2 наблюдались в тканях у большей части обследованных больных (Р<0,001), не только в гомогенатах злокачественных опухолей, но и в тканях полипов прямой и ободочной кишки. При этом отсутствие увеличения содержания ЛДГ5 в опухоли при раке выявлено только в 8,7% случаев (в 17…