Геном онкорнавирусов и онкогенез

Установлено, что синтез вирусной ДНК при заражении онкорнавирусами птиц чувствительных клеток в зависимости от множественности инфекции обнаруживается через 1 — 9 ч и продолжается до 48 ч, затем снижается. Интеграция начинается через 16 ч, а количество вирусной ДНК, ассоциированной с клеточной ДНК, возрастает до 72 ч после чего остается на достигнутом уровне. Процесс синтеза вирусной…

Количество неинтегрированной ДНК варьирует, но может составлять более 75% от общего количества вирусспецифической ДНК в недавно инфицированных клетках и от 20 до 70% в полностью трансформированных клетках. Неинтегрированная вирусная ДНК в любом случае представлена дуплексами с минус-нитями с длиной, соответствующей длине субъединице вирусного генома массой 2,5 — 3,0Х106 и относительно короткими плюс-нитями — 0,5 —…

Правомочность предполагаемой схемы первого этапа трансформации (фиксации вирусного генома в клеточном) подтверждается следующими фактами. Синтез вирусной РНК блокируется актиномицином D, при этом синтез белка продолжается как минимум 2 ч и блока в сборке вирионов не происходит. В клетках, зараженных онкорнавирусами, не удалось обнаружить нити РНК, комплементарной вирионной РНК. Осуществляются синтез вирусных ДНК-копий и их функционирование….

Кинетика заражения куриных фибробластов инфекционными ДНК, выделенными из клеток, инфицированных RSV и REV, отражается одноударной кривой, т. е. вирусная ДНК интегрирует с клеточным геномом как одна целостная единица. В случае RSV инфекционность оценивали по фокусобразующей способности, а в случае REV — по цитопатогенному действию. Показана независимая сегрегация двух вирусных геномов при одновременном заражении клеток RSV…

Субъединицы 30 — 40S РНК онкорнавирусов представляют собой типичные мРНК, которые транскрибируются в ядре с интегрированной вирусной ДНК с помощью клеточной полимеразы и транспортируются затем в цитоплазму, где часть из них направляется в рибосомы и транслируется в высокомолекулярный белковый предшественник, а часть включается в формирующиеся вирионы. Образовавшиеся вирусные частицы отпочковываются от клеточной мембраны, после чего…

Поскольку геном онкорнавирусов (60 — 70S РНК) состоит из нескольких субъединиц 30 — 40S РНК, процесс рекомбинации может осуществляться по одному из двух механизмов: перераспределения или кроссинговера. Так, Duesberg и соавт. (1975) доказали, что при рекомбинации онкорнавирусов птиц имеет место кроссинговер. Ранее эти авторы установили, что 30 — 40S РНК недефектных вирусов сарком в среднем…

Во фракции низкомолекулярной РНК обнаружены примеси 18S- и 28S-клеточных РНК. Функции низкомолекулярных вирусных 7 — 12S РНК остаются пока неясными. Особый интерес среди изолированных из вирионов фракций низкомолекулярных РНК представляют гетерогенные популяции 4S РНК, состоящие из собственно вирусных и клеточных тРНК, молекул 4S тРНК, выполняющих функции затравки в синтезе вирусной ДНК на матрице геномной РНК,…

Для исследования природы РНК-затравки в ДНК-полимеразной реакции использовали ее «нагрузку» мечеными олигодезоксинуклеотидами. Транскрипция 70S РНК RSV ревертазой вириона инициируется последовательностью фд Афд Афд Т…. Дальнейшую транскрипцию можно остановить перенесением в систему, в которой ТТФ замещен на ара УТФ. В этом случае продукт синтеза содержит последовательности фдА, ФдАФдА и ФдАфдАфараУ, все ковалентно связанные с 3´-концевым аденозином…

Как отмечалось выше, каждая субъединица 30 — 40S РНК имеет одинаковые концевые последовательности и примерно одинаковые размеры. Естественно, возникает вопрос о генетической идентичности или различии этих субъединиц. В первом случае геном онкорнавируса будет сегментарно-полиплоидным, а во втором — сегментарно-гаплоидным, т. е. каждая субъединица такого генома будет нести собственную генетическую информацию. Для определения последовательности нуклеотидов, или…

При сравнении недефектного (nd)RSV (штамм Шмидта — Руппина SR) и RSV штамм N8 (неспособного синтезировать гликопротеид вирусной оболочки) установлено, что 7 — 8 олигонуклеотидов, выявляемых в nd — SR — RSV, но отсутствующих в N 8 — RSV, образуют общий сегмент, который включает около 2200 нуклеотидов. Этот сегмент расположен на расстоянии 2800 — 5000 нуклеотидов…

Принципиально важным аспектом проблемы однородности 30 — 40S РНК является их сходство или отличие у трансформирующих и нетрансформирующих фибробласты вирусов, т. е. вирусов сарком и лейкоза. Наибольший интерес в этом аспекте представляет сравнение следующих групп вирусов птиц и млекопитающих: недефектных вирусов сарком, способных к одновременной трансформации фибробластов in vitro и образованию инфекционного потомства; нетрансформирующих вирусов…

Оказалось, что геном трансформирующих вирусов, как правило, содержит только субъединицы «а». РНК Рr — RSV субгрупп А, В или С состоит только из субъединиц «а» (даже после длительного пассирования на куриных клетках), а РНК SR — RSV — A, SR — RSV — В, SR — RSV — D (Н) и В77 включают и субъединицы…