29 мая 2012

Cубъединицы «а»

Оказалось, что геном трансформирующих вирусов, как правило, содержит только субъединицы «а». РНК Рr — RSV субгрупп А, В или С состоит только из субъединиц «а» (даже после длительного пассирования на куриных клетках), а РНК SR — RSV — A, SR — RSV — В, SR — RSV — D (Н) и В77 включают и субъединицы «b» в различных количествах. Это наблюдалось и в том случае, когда анализу подвергали вирусы на ранних этапах клонирования (8 — 10 дней).

Содержание субъединицы «b» не коррелировало со временем клонирования. Нетрансформирующие вирусы типа RAV2 или нетрансформирующие варианты трансформирующих вирусов nt — SR — RSV — A, nt — SR — RSV — В, AV — 3, nt — SR —  RSV — D(H), nt — SR — RSV — D(H4), nt — B77 — 42 и nt — B77 — 43 включали только субъединицу «b».

При пассировании вируса В77, выращенного на куриных клетках, на утиных эмбриональных фибробластах, отношение «а»/«b» в РНК существенно не менялось. Однако, если этот вирус клонировали на утиных фибробластах, трансформированные клоны продуцировали вирус, РНК которого состояла из субъединиц «b».

При переносе вируса на куриные клетки субъединицы «а» вновь появлялись и после нескольких пассажей отношение «а»/«b» становилось сходным с таковым у дикого штамма В77. Вирус В77, продуцируемый клонированными трансформированными утиными фибробластами, содержал значительный избыток нетрансформирующих вирусных частиц, и, видимо, как следствие этого в таких вирионах преобладали субъединицы «b».

Таким образом, можно предполагать, что геном вирусов сарком птиц состоит из 2 — 4 субъединиц «а», а геном вирусов лейкозов — из 2 — 4 субъединиц «b». У мутантов вирусов сарком, дефектных по трансформации, делеция в их геноме, вероятно, происходит за счет утраты sarc-последовательности, причем размер субъединиц у таких вирусов соответствует размеру субъединиц «Ь» вирусов лейкозов. Итак, субъединицы РНК вирусов сарком птиц имеют несколько больший размер, чем субъединицы РНК, образующие геном вирусов лейкоза.

Организация генома у трансформирующих вирусов сарком млекопитающих, как правило, дефектных по репликации, аналогичная, но вместе с тем иная, чем у недефектных вирусов сарком птиц.

Количественные сочетания в популяции вирусов сарком млекопитающих с вирусом-помощником могут быть различными. Например, у штамма Кирстен (Ki)MSV(MuLV) количество Ki — MSV в 10 раз больше, чем Ki — MuLV. Установлено, что коэффициент седиментации тотального препарата РНК Ki — MSV равен 55S, a Ki — MuLV — 62S.

После тепловой денатурации 55S РНК Ki — MSV образует одну основную субъединицу с молекулярной массой 2,3Х106 и одну минорную — 2,5Х106, a 62S РНК Ki — MuLV — только минорную.

Поскольку количество последней субъединицы в препарате РНК Ki — MSV составляет около 10%, можно предполагать, что она принадлежит MuLV. Иными словами, субъединица РНК Ki — MSV по массе меньше как минимум на 200 000 субъединицы РНК Ki — MuLV.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3. Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена….

Определен полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа мышей, кошек, крыс и обезьян, свидетельствующий о сходстве этих белков по этому критерию. Белок р30 богат остатками аминокислот с полярными боковыми цепями (лизин, аргинин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты или их амиды), беден цистеином, метионином, гистидином и изолейцином. Исследование первых 30 остатков с NН2-конца р30 показало высокий уровень родства…

В клетках, зараженных R — MuLV, идентифицировано несколько быстрометящихся нестабильных высокомолекулярных белков: Prla±b (с массой около 200 000) — предшественник р30, р15, р12, р 10 и обратной транскриптазы; Prla±b (с массой около 90 000) — предшественник gp69/71, p 15(Е) и р12(Е); Рr3 (с массой около 80 000) и Рг4 (с массой около 70 000) —…

Основная масса вирусспецифических полипептидов синтезируется на мембраносвязанных полирибосомах, а часть находится во фракции свободных полирибосом, где и происходит их синтез. Методом иммунопреципитации пептидов удалось определить размеры этих полирибосом — 350S. Эта величина свидетельствует о том, что вирусные мРНК транслируются на полирибосомах, состоящих из 12 монорибосом. На полирибосомах такого размера могут транслироваться мРНК с молекулярной массой…

Продолжая эти исследования, Pawson и соавт. (1977) установили, что в бесклеточной белоксинтезирующей системе (использовали либо асцитные, либо клетки L) белок, синтезируемый геномной 30 — 40S-PHK RSV, имел молекулярную массу 76 000 и осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и р12, р30, но не антисывороткой к gp85. Смотрите — Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo Следовательно, Рr76 является…