Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки

Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3.

Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена. Представленные данные свидетельствуют о том, что основная масса выявляемых предшественников — продуктов gag-гена (Рr3 и Рr4) образуется с помощью механизма, который не включает разрезание переформированного Рr1а + b.

Полученные факты объясняются моделью, согласно которой трансляция начинается с одной точки инициации и приводит либо к образованию только продукта gag-гена, либо, гораздо реже, к образованию общего gag — роl-продукта, что является следствием блокировки участка терминации на конце gag-гена.

Установлено, что синтез вирусных белков-предшественников осуществляется по трем путям, в G1, S- и G2-фазах клеточного цикла (Naso, Brown, 1977). Во время этих периодов синтез вирусных белков составлял от 4,5 до 5,5% синтеза тотальных клеточных белков.

G1-пути синтеза белковых предшественников не нуждается в синтезе вирусной РНК, а два других зависят от присутствия вновь синтезируемой вирусной РНК.

Измерение уровня внеклеточного и внутриклеточного р30 в процессе 30-минутного и 24-часового периодов вытеснения метки (35S-метионина) показало, что основная масса вновь синтезированного р30 в клетках опухолей вилочковой железы кошек, перманентно инфицированных FeLV, включается во внеклеточный вирус (Okasinski, Velicer, 1976). При анализе триптических гидролизатов р60 и р30 выявлено, что 13 и 15 пептидов, обнаруженных в р30, определяются и в р60, т. е. р60 является внутриклеточным предшественником р30 FeLV.

При выращивании клеток в присутствии аналога пролина b-азотидил-2-карбоксиловой кислоты, кроме Рr60, выявляется и Рr70.

При сравнении триптических пептидов Рr70 и Рr60 со структурными белками вириона FeLV обнаружено, что оба эти белка-предшественника содержат р30, р15, р11 и р10 FeLV.

В Рr60 отсутствует только пептид р11. Показано, что образование структурных пептидов FeLV происходит в следующем порядке: p11 — р15 — р10 — р30 (Okasinski, Velicer, 1977).

Представленные данные указывают на то, что мелкие структурные белки вириона синтезируются как часть белка-предшественника Рr70.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко