Прямая пропорциональность между дозой различных агентов и урожаем вируса
Установлена прямая пропорциональность между дозой различных агентов (митомицин С, бромдезоксиуридин, УФ- и 60Со-γ-облучение) и урожаем вируса, освобожденного из трансформированных клеток (Kaplan et al., 1975).
Урожай вируса увеличивается по сравнению с контролем в 1000 — 10 000 раз. В линиях — продуцентах инфекционного SV40 доля индуцированных клеток составляла 2 — 6% (по данным определения продукции V-антигена или по тесту образования инфекционных центров после обработки митомицином С).
Наиболее эффективная индукция SV40 наблюдалась при добавлении митомицина С через 4 ч и УФ-облучения через 1 — 2 ч после пика синтеза ДНК.
Наиболее чувствительный период клеточного цикла для активации вирусного генома и наиболее резистентный к УФ-облучению период в клетках эукариот совпадают. Возможно, что в этом периоде клеточные механизмы репарации ДНК наиболее активны и облегчают образование разрывов цепочки ДНК и вырезание вирусного генома.
Таким образом, вероятно, повреждение ДНК и образование однонитевых разрывов могут быть ранними событиями при индукции инфекционного вируса из трансформированных клеток.
Существенно, что во многих исследованных тест-системах вирус, освобожденный из клеточного генома трансформированной «безвирусной» клетки, по свойствам ничем не отличался от исходного, индуцировавшего трансформацию этой культуры клеток. Вместе с тем выявлены и отличия в молекулах ДНК «спасенных» вирусов из различных клонов клеток, трансформированных вирусом SV40 (Botchan et al., 1975).
ДНК SV40 из клонов SV Т2-3,4 и 5 неотличима по рестриктазным фрагментам (обработка рестриктазами Hind II и III и из Е. coli RI) от ДНК SV40 дикого типа. ДНК SV40 из клона SV T2-0 отличается от ДНК дикого типа по двум фрагментам — С и F, в которых обнаружены делеции, равные 150 и 30 нуклеотидам соответственно. ДНК SV40 из клона SVT2-1 также отличается от ДНК дикого типа по фрагментам С и F.
Однако в этом случае фрагмент С характеризуется наличием делеции всего лишь в 60 нуклеотидов, а фрагмент G короче соответствующего фрагмента ДНК дикого типа на 30 нуклеотидов. Показано, что эффективность трансформации клеток мышей линий BALB/c и ЗТЗ SV40, освобожденным из клона клеток SV T2-0, в 500 раз превышает соответствующую способность вируса дикого типа.
Итак, в «безвирусных» клетках, не содержащих ни инфекционных вирусных частиц, ни капсидных вирусных белков, присутствует полный вирусный геном (или его часть), вызвавший их опухолевую трансформацию.
Это строго доказано в опытах на различных клеточных системах как для РНК-, так и ДНК-содержащих онковирусов. Таким образом, при неопластической трансформации в геноме клетки всегда находятся вирусные гены, но, как правило, они теряют способность к синтезу зрелого инфекционного вируса. Это относится главным образом к ДНК-содержащим вирусам.
Неспособность большинства вирусов саморепродуцироваться в трансформированных ими клетках обусловлена, по-видимому, различными причинами. В некоторых случаях их геномы дефектные (вирус саркомы Рауса и др.) и не содержат информации для синтеза компонентов инфекционных вирусных частиц.
В других случаях они могут приобретать эту дефектность в результате повреждения вирусного генетического аппарата, делающего невозможным их репликацию.
Иногда же способность реплицироваться в трансформированной клетке определяется биологическими особенностями того или иного штамма одного и того же вируса.
Наконец, репродуктивная способность онковирусов обусловливается наличием клеточных факторов, необходимых для репликации.
«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко
В экспериментах, проведенных А. И. Агеенко и соавт. (1975), из перевивных сарком (с 50-й по 60-ю генерацию), индуцированных у хомяков аденовирусом 12-го типа, полный инфекционный вирус выделялся постоянно. Обнаружено, что при заражении центрифугатами разрушенных клеток перевивных сарком культуры почки эмбриона человека (ПЭЧ) в среднем через 5 дней отмечалось начало цитогенного действия вируса. Из первичноиндуцированных сарком…
Метод искусственных гетерокарионов оказался весьма эффективен для многих тест-систем клеток, трансформированных как РНК-, так и ДНК-содержащими онковирусами. В некоторых случаях индикаторные культуры использовали даже для титрования освобожденного вируса по фокусам трансформации, которые он индуцировал (Svoboda et al., 1975). Во всех этих экс-периментах чем больше был процент гетерокарионов, тем выше оказалась эффективность метода. Однако в системах,…
Клетки, трансформированные всеми исследованными в настоящее время онкогенными ДНК-содержащими вирусами, в основном являются непермиссивными для полного репродуктивного цикла трансформирующего их вируса, и поэтому естественно, что полный инфекционный вирус ими не продуцируется. Как известно, существуют два крайних ответа пермиссивных клеток природного хозяина при взаимодействии с геномом ДНК-содержащих онковирусов — лизис и трансформация. Трансформация осуществляется тогда, когда…
Итак, по характеру взаимоотношений онковируса с трансформированной клеткой можно выделить следующие типы опухолевых клеток. Вируспродуцирующие клетки. Как правило, это относится к РНК-содержащим вирусам. Вирогенные клетки, в которых удается активировать вирусный геном с помощью различных методических приемов (трансплантации их естественным хозяевам онковируса или при использовании «контактной индукции», т. е. прямого контакта опухолевой клетки с чувствительной «индикаторной»…
Изучение посттранскрипционных превращений вирусных мРНК в клетках разных линий, трансформированных SV40, показало, что в тотальном препарате РНК содержатся молекулы, комплементарные ранней нити ДНК SV40 на 22 — 69%, в то время как цитоплазматическая фракция РНК тех же клеток гибридизируется с Е-нитью лишь на 14 — 16% независимо от штамма клеток (Leong et al., 1976). Во…
