18 июля 2012

Изучение посттранскрипционных превращений вирусных мРНК

Изучение посттранскрипционных превращений вирусных мРНК в клетках разных линий, трансформированных SV40, показало, что в тотальном препарате РНК содержатся молекулы, комплементарные ранней нити ДНК SV40 на 22 — 69%, в то время как цитоплазматическая фракция РНК тех же клеток гибридизируется с Е-нитью лишь на 14 — 16% независимо от штамма клеток (Leong et al., 1976).

Во всех исследованных системах поздняя ДНК либо не транскрибировалась вообще, либо, если транскрипция имела место, соответствующие РНК в цитоплазму практически не попадали.

Исключение составили лишь клетки мышей линии SV — ЗТС19, в тотальной и цитоплазматической РНК которых содержались молекулы, несущие 12 и 10% последовательностей поздней ДНК соответственно.

Следовательно, для трансформации клеток достаточно вирусной информации, заключенной во фрагменте ДНК, равном 14 — 16% длины минус-Е-нити ДНК.

В ядре трансформированной клетки синтезируются молекулы вирусной ДНК различной длины, однако переход их в цитоплазму сопряжен с унификацией их по длине и нуклеотидным последовательностям.

Причем количество вирусспецифических мРНК в цитоплазме в несколько раз ниже их содержания в тотальном препарате. В случае вируса полиомы ранняя вирусспецифическая мРНК. в трансформированных клетках транскрибируется с Е-нити с сегмента, локализованного в Е-фрагменте Hpall через начальные 2/3 раннего участка и заканчивающегося в районе В-фрагмента Hpall. Представлены данные, позволяющие предполагать, что и в системе in vivo происходит, по-видимому, асимметричная транскрипция интегрированного вирусного генома.

Вместе с тем экспериментальное обоснование получила и противоположная точка зрения, согласно которой в клетках, продуктивно зараженных SV40 и вирусом полиомы, осуществляется симметрическая транскрипция интегрированной вирусной ДНК- К этому выводу Aloni (1975) пришел на основании следующих экспериментальных данных.

Асимметрическая вирусная РНК, синтезированная in vitro, содержащая все последовательности и эквивалентная одной из нитей ДНК, становится устойчивой к действию панкреатической РНКазы после отжига с денатурированной двунитевой РНК, очищенной из инфицированных клеток.

Величина вирусной двунитевой РНК, определяемая электронно-микроскопически, соответствует размеру гигантской интактной молекулы ДНК SV40.

Молекулы вирусного РНК-предшественника, величина которых сравнима с величиной полного транскрипта генома SV40, обладают высоким уровнем самоотжига. Симметрические РНК-транскрипты затем окончательно «созревают» в ядре.

Вероятно, этот процесс происходит в информосомах, получающийся РНК-продукт имеет коэффициент седиментации 19S. Эти 198-молекулы РНК частично самокомплементарны и содержат сегменты поли-А. В пике 19S находятся РНК, транскрибируемые как с раннего, так и позднего участка ДНК SV40.

Ядерные 19S РНК транспортируются затем в цитоплазму, где часть из них превращается в вирусную 16S РНК, которая является основным компонентом вирусной мРНК, накапливающимся в цитоплазме инфицированных клеток.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Установлена прямая пропорциональность между дозой различных агентов (митомицин С, бромдезоксиуридин, УФ- и 60Со-γ-облучение) и урожаем вируса, освобожденного из трансформированных клеток (Kaplan et al., 1975). Урожай вируса увеличивается по сравнению с контролем в 1000 — 10 000 раз. В линиях — продуцентах инфекционного SV40 доля индуцированных клеток составляла 2 — 6% (по данным определения продукции V-антигена…

Метод искусственных гетерокарионов оказался весьма эффективен для многих тест-систем клеток, трансформированных как РНК-, так и ДНК-содержащими онковирусами. В некоторых случаях индикаторные культуры использовали даже для титрования освобожденного вируса по фокусам трансформации, которые он индуцировал (Svoboda et al., 1975). Во всех этих экс-периментах чем больше был процент гетерокарионов, тем выше оказалась эффективность метода. Однако в системах,…

В экспериментах, проведенных А. И. Агеенко и соавт. (1975), из перевивных сарком (с 50-й по 60-ю генерацию), индуцированных у хомяков аденовирусом 12-го типа, полный инфекционный вирус выделялся постоянно. Обнаружено, что при заражении центрифугатами разрушенных клеток перевивных сарком культуры почки эмбриона человека (ПЭЧ) в среднем через 5 дней отмечалось начало цитогенного действия вируса. Из первичноиндуцированных сарком…

Клетки, трансформированные всеми исследованными в настоящее время онкогенными ДНК-содержащими вирусами, в основном являются непермиссивными для полного репродуктивного цикла трансформирующего их вируса, и поэтому естественно, что полный инфекционный вирус ими не продуцируется. Как известно, существуют два крайних ответа пермиссивных клеток природного хозяина при взаимодействии с геномом ДНК-содержащих онковирусов — лизис и трансформация. Трансформация осуществляется тогда, когда…

Итак, по характеру взаимоотношений онковируса с трансформированной клеткой можно выделить следующие типы опухолевых клеток. Вируспродуцирующие клетки. Как правило, это относится к РНК-содержащим вирусам. Вирогенные клетки, в которых удается активировать вирусный геном с помощью различных методических приемов (трансплантации их естественным хозяевам онковируса или при использовании «контактной индукции», т. е. прямого контакта опухолевой клетки с чувствительной «индикаторной»…