13 июля 2012

ДНК SV40 в геном клетки при литической инфекции

Обнаружена интеграция ДНК SV40 в геном клетки при литической инфекции в форме отдельных фрагментов с субгеномной длиной.

Такие интегрированные молекулы появляются через день после заражения и способны к репликации. Впервые линейная ковалентная интеграция выявляется в то время, когда определяется синтез Т-антигена (Tuxler, 1977).

Только несколько копий вирусного генома интегрируется между 10 ч и 18 ч инфекции, т. е. когда начинается репликация клеточной и вирусной ДНК. Frenkel (1977) предположил, что часть нуклеотидов, обнаруживающихся при деградации вирусной ДНК1 SV40 в процессе продуктивной инфекции, используется клеткой для синтеза клеточной ДНК.

Указанные нуклеотиды образуют последовательности, специфичные для клеточной ДНК, а не для вирусной, и, таким образом, обнаружение в клеточной ДНК «вирусных» нуклеотидов не является отражением процесса интеграции вирусных фрагментов в клеточный геном.

Исследование интегрированной формы аденовирусной ДНК А2, появляющейся на ранней стадии при продуктивной инфекции, также позволило выявить, что она по величине соответствует большинству фрагментов, которые образуются при действии рестриктазы из Е. coli RI на вирусный геном.

Наряду с этим часть фрагментов, содержащих последовательности ДНК вируса А2, имели иную величину, чем фрагменты, полученные при помощи Е. coli RI (Schik et al., 1976). Полагают, что такие фрагменты, помимо последовательностей ДНК вируса А2, содержат последовательности клеточной ДНК.

Представлены данные, свидетельствующие о том, что в продуктивно инфицированных клетках вирусов простого герпеса 1-го типа имеет место интеграция ДНК HSVI с Хромосомальной ДНК (Biegeleisen, Rush, 1976). Такие клетки, содержащие вирусные геномы в своих хромосомах (до 50 копий в расчете на одну клетку), представляют потенциальный источник как трансформационных, так и лизогенных процессов.

Следовательно, интегративный тип взаимодействия с клеткой, по-видимому, вообще характерен для онковирусов.

Обнаружение интеграции при литической инфекции сразу же стимулировало исследования, направленные на выявление возможной специфики этого процесса при опухолевой трансформации клеток.

Принципиально важно было выяснить специфичность места интеграции при трансформации, т. е. определить точки разрыва клеточной ДНК, необходимые для последующего встраивания вирусного генома.

Не менее существенным было уточнение и точек разрыва вирусной ДНК при литической инфекции и трансформации, поскольку специфичность разрыва в последующем определяет и характер транскрибируемых вирусспецифических мРНК- Важно также идентифицировать инициирующий механизм интеграции — наличие гена (или генов) в составе вирусного генома, ответственного за интеграцию при трансформации и литической инфекции.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Метод искусственных гетерокарионов оказался весьма эффективен для многих тест-систем клеток, трансформированных как РНК-, так и ДНК-содержащими онковирусами. В некоторых случаях индикаторные культуры использовали даже для титрования освобожденного вируса по фокусам трансформации, которые он индуцировал (Svoboda et al., 1975). Во всех этих экс-периментах чем больше был процент гетерокарионов, тем выше оказалась эффективность метода. Однако в системах,…

В экспериментах, проведенных А. И. Агеенко и соавт. (1975), из перевивных сарком (с 50-й по 60-ю генерацию), индуцированных у хомяков аденовирусом 12-го типа, полный инфекционный вирус выделялся постоянно. Обнаружено, что при заражении центрифугатами разрушенных клеток перевивных сарком культуры почки эмбриона человека (ПЭЧ) в среднем через 5 дней отмечалось начало цитогенного действия вируса. Из первичноиндуцированных сарком…

Установлена прямая пропорциональность между дозой различных агентов (митомицин С, бромдезоксиуридин, УФ- и 60Со-γ-облучение) и урожаем вируса, освобожденного из трансформированных клеток (Kaplan et al., 1975). Урожай вируса увеличивается по сравнению с контролем в 1000 — 10 000 раз. В линиях — продуцентах инфекционного SV40 доля индуцированных клеток составляла 2 — 6% (по данным определения продукции V-антигена…

Клетки, трансформированные всеми исследованными в настоящее время онкогенными ДНК-содержащими вирусами, в основном являются непермиссивными для полного репродуктивного цикла трансформирующего их вируса, и поэтому естественно, что полный инфекционный вирус ими не продуцируется. Как известно, существуют два крайних ответа пермиссивных клеток природного хозяина при взаимодействии с геномом ДНК-содержащих онковирусов — лизис и трансформация. Трансформация осуществляется тогда, когда…

Итак, по характеру взаимоотношений онковируса с трансформированной клеткой можно выделить следующие типы опухолевых клеток. Вируспродуцирующие клетки. Как правило, это относится к РНК-содержащим вирусам. Вирогенные клетки, в которых удается активировать вирусный геном с помощью различных методических приемов (трансплантации их естественным хозяевам онковируса или при использовании «контактной индукции», т. е. прямого контакта опухолевой клетки с чувствительной «индикаторной»…