13 июля 2012

Содержание вирусной ДНК обоих типов

Клетки, трансформированные HVS, содержали оба типа вирусной ДНК: 0,69 — 2,27% Н-ДНК, что соответствует 83 — 247 геномам на клетку, и 0,72 — 1,92% L-ДНК (Fleckenstein et al., 1977). Большинство вирусных геномов в трансформированных культурах лимфоцитов, вероятно, дефектны, поскольку часть последовательностей, обнаруживающихся в ДНК вирионов, в ДНК, изолированной из трансформированных клеток, отсутствует.

Во всех трансформированных клетках выявлен относительный избыток повторяющихся Н-последовательностей (при сравнении с отношением Н-ДНК/L-ДНК в геномах вирионов HVS).

В отношении еще одного представителя вирусов группы герпеса — ВБМ — установлено, что среднее число вирусных ДНК-копий составляет 3 — 15 на диплоидный геном, причем клетки опухолей содержат большее число эквивалентов вирусного генома, чем клетки других органов цыплят с болезнью Марека.

Поскольку первоначально в опытах на многих тест-системах установлено, что стабильная трансформация всегда сопровождается встраиванием вирусного генома в клеточный, на определенном этапе разработки этой проблемы сложилось мнение, согласно которому интеграция обязательно ассоциирована с трансформацией. Однако по мере накопления фактического материала оказалось, что это не совсем так.

Во-первых, было показано, что морфологические ревертанты трансформированных клеток сохраняют вирусный геном в таком же количестве, как и трансформированные, возвращаясь к нормальному фенотипу (Grady, North, 1976).

Во-вторых, интеграция как обратимый процесс может иметь место при литической инфекции с высокой множественностью, причем в зараженных клетках иногда в интегрированном состоянии может обнаруживаться более 20 000 эквивалентов вирусного генома. В связи с этим можно предполагать, что частота ошибочных «вырезаний» интегрированных геномов велика.

Действительно, вследствие таких рекомбинаций образуется гетерогенная популяция вирусных ДНК, содержащих делеции и участки, замещенные клеточной ДНК.

Использование достаточно чувствительных методов позволило выявить специфические участки «вырезания» и последовательности клеточных ДНК, в пределах которых происходит интеграция. Установлено, что в случае SV40 существуют один основной и два минорных участка в вирусной ДНК с высокой частотой замещения.

Эти замещения при продуктивной инфекции главным образом содержат повторяющиеся последовательности клеточной ДНК. Вместе с тем данные по кинетике реассоциации с последующей обработкой комплекса нуклеазой SI, специфичной для однонитевых полинуклеотидов, свидетельствуют о том, что уникальные последовательности также находятся в близком соседстве с вирусной ДНК.

При трансформации, вероятно, интеграция осуществляется в специфических, уникальных, участках клеточного генома, и очищенные препараты вирусной ДНК могут содержать как встречающиеся в других штаммах неповторяющиеся клеточные последовательности, так и уникальные, которые не определяются ни в одном из других вирусных штаммов (Oren et al., 1976).


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Метод искусственных гетерокарионов оказался весьма эффективен для многих тест-систем клеток, трансформированных как РНК-, так и ДНК-содержащими онковирусами. В некоторых случаях индикаторные культуры использовали даже для титрования освобожденного вируса по фокусам трансформации, которые он индуцировал (Svoboda et al., 1975). Во всех этих экс-периментах чем больше был процент гетерокарионов, тем выше оказалась эффективность метода. Однако в системах,…

В экспериментах, проведенных А. И. Агеенко и соавт. (1975), из перевивных сарком (с 50-й по 60-ю генерацию), индуцированных у хомяков аденовирусом 12-го типа, полный инфекционный вирус выделялся постоянно. Обнаружено, что при заражении центрифугатами разрушенных клеток перевивных сарком культуры почки эмбриона человека (ПЭЧ) в среднем через 5 дней отмечалось начало цитогенного действия вируса. Из первичноиндуцированных сарком…

Установлена прямая пропорциональность между дозой различных агентов (митомицин С, бромдезоксиуридин, УФ- и 60Со-γ-облучение) и урожаем вируса, освобожденного из трансформированных клеток (Kaplan et al., 1975). Урожай вируса увеличивается по сравнению с контролем в 1000 — 10 000 раз. В линиях — продуцентах инфекционного SV40 доля индуцированных клеток составляла 2 — 6% (по данным определения продукции V-антигена…

Клетки, трансформированные всеми исследованными в настоящее время онкогенными ДНК-содержащими вирусами, в основном являются непермиссивными для полного репродуктивного цикла трансформирующего их вируса, и поэтому естественно, что полный инфекционный вирус ими не продуцируется. Как известно, существуют два крайних ответа пермиссивных клеток природного хозяина при взаимодействии с геномом ДНК-содержащих онковирусов — лизис и трансформация. Трансформация осуществляется тогда, когда…

Итак, по характеру взаимоотношений онковируса с трансформированной клеткой можно выделить следующие типы опухолевых клеток. Вируспродуцирующие клетки. Как правило, это относится к РНК-содержащим вирусам. Вирогенные клетки, в которых удается активировать вирусный геном с помощью различных методических приемов (трансплантации их естественным хозяевам онковируса или при использовании «контактной индукции», т. е. прямого контакта опухолевой клетки с чувствительной «индикаторной»…