4 июня 2012

Низкомолекулярные РНК в составе вириона

Во фракции низкомолекулярной РНК обнаружены примеси 18S- и 28S-клеточных РНК. Функции низкомолекулярных вирусных 7 — 12S РНК остаются пока неясными. Особый интерес среди изолированных из вирионов фракций низкомолекулярных РНК представляют гетерогенные популяции 4S РНК, состоящие из собственно вирусных и клеточных тРНК, молекул 4S тРНК, выполняющих функции затравки в синтезе вирусной ДНК на матрице геномной РНК, и состоящие из продуктов деградации высокомолекулярной вирионной 60 — 70S РНК.

В вирионах онкорнавирусов обнаружены «свободные» тРНК и тРНК, входящие в состав геномной вирусной РНК- Спектр этих тРНК, как отмечалось выше, определяется в основном геномом вируса, поскольку разные вирусы (например, онкорнавирусы птиц, культивируемые на одних и тех же клетках) имеют различный набор РНК.

Следовательно, можно предполагать, что специфичность узнавания белков в процессе их синтеза может быть характерной уже для этапа взаимодействия аминокислоты со специфической тРНК.

Хроматографический анализ изоакцепторных тРНК показал, что препараты вирусных и клеточных тРНК значительно различаются по относительному содержанию аргинил-, лизил-, аспартил- и глутамилтРНК, хотя разница в качественном составе отсутствовала.

Аналогичные результаты получены при сравнении изоакцепторных тРНК трансформирующих и нетрансформирующих вирусов птиц (Taylor, 1977). Вместе с тем выявлены существенные различия в составе изоакцепторных метионил-тРНК трансформирующих и нетрансформирующих онкорнавирусов.

У вирусов 1-й группы преобладающим компонентом была метиониновая (мет)тРНК IV. Эта тРНК, так же как и метионил-тРНК, не участвует в инициации синтеза белка (инициирующие — мет-тРНК I и II), однако способна включать остатки метионина внутри полипептидной цепи. Для исключения возможности избирательного ацилирования этой тРНК ферментами из печени исследованы метионил-тРНК, ацилированные аминоацил-тРНК-синтетазами из трансформированных клеток.

Отношение изоакцепторных форм мет-тРНК в этом случае было таким же. Следовательно, избирательное включение мет-тРНК в вирионы трансформирующих вирусов, по-видимому, не определяет их трансформирующей активности.

«Ассоциированные» РНК связаны с вирионной РНК водородными связями на 5´-конце молекулы и могут быть отделены от субъединиц при температурной денатурации.

Функции этих «ассоциированных» РНК, по-видимому, сводятся в основном к поддержанию специфической конфигурации 60 — 70S РНК и инициации синтеза ДНК. Таким образом, главный затравочный участок локализуется на 5-конце и его удаление от этого конца молекулы не превышает расстояния, составляющего 10% длины 35S РНК.

Подсчитано, что на одну молекулу 35S РНК приходятся в среднем один участок связывания и, соответственно, одна молекула РНК-затравки. Установлено, что тРНК связывается с 35S РНК последовательностью в 16 нуклеотидов (У — Ц — А — Ц — Г — … — Ц — Г — Г — Г — Г — У — ЦА — Ц — Цф), которая начинается с предпоследнего основания на 3´-конце затравки через акцептирующий участок в сторону петли IV в тРНК (Cordell et al., 1976).


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3. Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена….

Определен полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа мышей, кошек, крыс и обезьян, свидетельствующий о сходстве этих белков по этому критерию. Белок р30 богат остатками аминокислот с полярными боковыми цепями (лизин, аргинин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты или их амиды), беден цистеином, метионином, гистидином и изолейцином. Исследование первых 30 остатков с NН2-конца р30 показало высокий уровень родства…

Основная масса вирусспецифических полипептидов синтезируется на мембраносвязанных полирибосомах, а часть находится во фракции свободных полирибосом, где и происходит их синтез. Методом иммунопреципитации пептидов удалось определить размеры этих полирибосом — 350S. Эта величина свидетельствует о том, что вирусные мРНК транслируются на полирибосомах, состоящих из 12 монорибосом. На полирибосомах такого размера могут транслироваться мРНК с молекулярной массой…

Продолжая эти исследования, Pawson и соавт. (1977) установили, что в бесклеточной белоксинтезирующей системе (использовали либо асцитные, либо клетки L) белок, синтезируемый геномной 30 — 40S-PHK RSV, имел молекулярную массу 76 000 и осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и р12, р30, но не антисывороткой к gp85. Смотрите — Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo Следовательно, Рr76 является…

В клетках, зараженных R — MuLV, идентифицировано несколько быстрометящихся нестабильных высокомолекулярных белков: Prla±b (с массой около 200 000) — предшественник р30, р15, р12, р 10 и обратной транскриптазы; Prla±b (с массой около 90 000) — предшественник gp69/71, p 15(Е) и р12(Е); Рr3 (с массой около 80 000) и Рг4 (с массой около 70 000) —…