29 мая 2012

Трансформирование фибробластов

Если учесть, что Ki — MSV обладает способностью трансформировать фибробласты и эта информация по аналогии с онкогеном вирусов сарком птиц должна содержаться в сегменте с минимальной молекулярной массой 300 000, то для независимой репликации Ki — MSV, по-видимому, необходим как минимум дополнительный фрагмент РНК с массой 500 000. Эти предположения полностью согласуются с результатами сравнительного анализа субъединиц РНК дефектного MSV(R-T+) с субъединицами РНК недефектного штамма MSV(R+T+), независимого от вируса-помощника.

Оказалось, что 60 — 70S комплекс Mo-MSV состоит из 2 классов субъединиц РНК: 38S (10 000 нуклеотидов, 10 килобаз), которая специфична для MuLV (L-субъединица) и 30S (5 — 6 килобаз) — специфичная для MSV (S-субъединица). 5´ — концы L- и S-субъединиц обладают высоким уровнем гомологии (Maisel et al., 1978).

Выявлены три группы нуклеотидных последовательностей, представляющих собой различные части вирусного комплекса, который содержит 3-кратный избыток Мо — MSV над Mo — MuLV.

Первую группу составляет саркомная вирусспецифическая фракция (ДНКсарк) с последовательностями, негомологичными с РНК MuLV, во вторую входит саркомнолейкозная фракция (ДНКобщ), имеющая последовательности, общие для РНК MSV и MuLV, к третьей группе отнесена лейкозная фракция (ДНКлейк), представляющая собой последовательность нуклеотидов, комплементарную только MuLV (Frankel et al. 1976). 35S-PHK только MuLV не гибридизируется с ДНКсарк., но гибридизируется соответственно на 40 и 50% С ДНКлейк. И ДНКобщ. ДНКсарк.

составляет 25% последовательностей генома MSV, а остальная часть вирусного генома представлена последовательностями ДНКобщ. Некоторые последовательности ДНКобщ. встречаются в двух других вирусах сарком и нескольких изолятах MuLV. Напротив, ДНКсарк. почти не имеет гомологии с двумя другими изолятами MSV.

Получены данные, позволяющие предполагать, что нуклеотидные последовательности Mo — MSV, ответственные за поддержание трансформации, не идентичны последовательностям вируса лейкоза Абельсона или вируса саркомы Харви, которые ответственны за способность этих вирусов трансформировать фибробласты in vitro. Последовательности ДНКсарк. обнаружены в ДНК из нормальных клеток мышей. Frankel и Fischinger (1977) исследовали скорость эволюционной дивергенции нуклеотидных последовательностей, специфичных для ДНКсарк. и ДНКлейк. частей генома Mo — MSV.

Оказалось, что 100%) последовательностей ДНКсарк. присутствует в клетках, инфицированных Mo — MSV, 71 — 91% — в нормальных клетках мышей инбредных линий, 57 — 61% в клетках диких мышей, затем по количеству указанных последовательностей следуют клетки крыс (56%), хомяков (41%), человека (26%), кроликов и собак (21%), морских свинок (16%), крупного рогатого скота и кур (6%). Последовательности ДНКлейк. закреплены в геноме исследованных видов менее прочно.

Уровень гибридизации в этом случае свидетельствует о том, что в области последовательностей ДНКлейк. в процессе эволюции происходят более заметные мутационные изменения.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3. Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена….

Определен полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа мышей, кошек, крыс и обезьян, свидетельствующий о сходстве этих белков по этому критерию. Белок р30 богат остатками аминокислот с полярными боковыми цепями (лизин, аргинин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты или их амиды), беден цистеином, метионином, гистидином и изолейцином. Исследование первых 30 остатков с NН2-конца р30 показало высокий уровень родства…

В клетках, зараженных R — MuLV, идентифицировано несколько быстрометящихся нестабильных высокомолекулярных белков: Prla±b (с массой около 200 000) — предшественник р30, р15, р12, р 10 и обратной транскриптазы; Prla±b (с массой около 90 000) — предшественник gp69/71, p 15(Е) и р12(Е); Рr3 (с массой около 80 000) и Рг4 (с массой около 70 000) —…

Основная масса вирусспецифических полипептидов синтезируется на мембраносвязанных полирибосомах, а часть находится во фракции свободных полирибосом, где и происходит их синтез. Методом иммунопреципитации пептидов удалось определить размеры этих полирибосом — 350S. Эта величина свидетельствует о том, что вирусные мРНК транслируются на полирибосомах, состоящих из 12 монорибосом. На полирибосомах такого размера могут транслироваться мРНК с молекулярной массой…

Продолжая эти исследования, Pawson и соавт. (1977) установили, что в бесклеточной белоксинтезирующей системе (использовали либо асцитные, либо клетки L) белок, синтезируемый геномной 30 — 40S-PHK RSV, имел молекулярную массу 76 000 и осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и р12, р30, но не антисывороткой к gp85. Смотрите — Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo Следовательно, Рr76 является…